酿酒酵母adh2和ald6双基因缺失突变株的构建

作     者：王艳尊 雷娟娟 江贤章 高媛媛 李欣 蓝灿华 陈由强 陈如凯 黄建忠 

作者机构：福建师范大学生命科学学院工业微生物教育部工程研究中心福建福州350108 

出 版 物：《微生物学通报》 (Microbiology China)

年 卷 期：2009年第36卷第2期

页      面：211-216页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家"948"(No.2006-G37) 福建省发改委重大项目[No.(2004)477] 福建省科技厅重大项目(No.2005Q007) 

主　　题：酿酒酵母 ald6 adh2 LFH-PCR 基因敲除 

摘      要：酿酒酵母乙醇合成代谢过程中,阻断或削弱乙醛至乙酸代谢流不但能增强乙醇合成流,同时还能降低发酵乙酸含量。本研究以乙醇脱氢酶Ⅱ(adh2)基因缺陷型酿酒酵母YS2-Δadh2为出发菌株,应用长侧翼同源两步PCR(LFH-PCR)策略构建乙醛脱氢酶Ⅵ(ald6)基因敲除组件,转化酿酒酵母YS2-Δadh2敲除ald6基因,之后转入表达质粒pSH65到阳性克隆中,半乳糖诱导表达Cre重组酶切除Kanr基因筛选标记,最后,传代丢失质粒pSH65获得单倍体ald6基因缺失突变株。利用同样的敲除组件和技术再次敲除其等位基因,最终获得双基因缺失突变株YS2-△adh2-Δald6。发酵实验表明与出发菌株YS2相比,突变株乙酸合成量降低18%,乙醇最高产量提高12.5%。