鼠心钠素基因在大肠杆菌中的融合表达及产物的分离纯化

作     者：罗红良 严维耀 郑兆鑫 

作者机构：复旦大学遗传工程国家重点实验室 

出 版 物：《复旦学报（自然科学版）》 (Journal of Fudan University：Natural Science)

年 卷 期：1998年第37卷第4期

页      面：428-432页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 071010[理学-生物化学与分子生物学] 081704[工学-应用化学] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-化学工程与技术] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

主　　题：鼠心钠素 LacZ基因 融合蛋白表达 大肠杆菌 

摘      要：将克隆有化学合成的鼠心钠素基因的质粒pXZ－α－ANP－590改建成质粒pLH280，转化大肠杆菌表达融合蛋白LacZ＇－280－α－ANP．当带有此质粒的最适宿主菌JM101在37℃，270r／min摇床培养14h，融合蛋白表达量可达最高值．利用超声波破碎菌体；通过盐酸胍抽提融合蛋白；透析除去盐酸胍后用溴化氰裂解融合蛋白；SephadexG－25柱层析后收集样品；各峰样品冷冻干燥后进行放免活性测定．结果说明第一峰样品具有放免活性．HPLC分析和生物活性测定均证明此分离样品与标准心钠素样品基本一致．处理1L携带质粒pLH280的发酵液（D（600）＝2．0）可得1．2mg有活性的α－ANP，较之携带质粒pXZ－α－ANP－590的发酵液（D（600）＝2．0）的α－ANP产量提高了4倍．