Asp126、Asp130、Asp134对人白介素18功能的影响(英文)

作     者：傅奕 裴冬生 赵惠仁 

作者机构：徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心!徐州221002 

出 版 物：《Acta Biochimica et Biophysica Sinica》 (生物化学与生物物理学报(英文版))

年 卷 期：2001年第33卷第4期

页      面：368-372页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

主　　题：人白细胞介素18 蛋白质结构与功能 定点诱变 干扰素-γ 

摘      要：为研究人白细胞介素 18(hIL 18)中一些氨基酸残基对IL 18功能的影响 ,用重叠延伸PCR定点诱变技术构建hIL 18突变体hIL 18D12 6N、hIL 18D13 0 K、hIL 18D134 K。将突变体cDNA与原核表达载体pJW2重组并转化大肠杆菌DH5α。经热诱导表达 ,3个突变体占菌体总蛋白质的 15 %～ 31%以上。SDS PAGE证实 ,表达的蛋白质以包含体形式存在。包含体经超声破碎 ,2mol/L尿素洗涤 ,8mol/L尿素溶解 ,SephadexG 75柱纯化后 ,纯度均可达 95 %以上。Western印迹表明 3个突变体与野生型hIL 18具有相同的免疫原性。纯化的突变体蛋白质经复性后 ,以诱导人外周血单个核细胞 (PBMC)产生干扰素 γ(IFN γ)的能力为指标检测其活性 ,结果显示 3个突变体的生物学活性分别为野生型IL 18的 32 %、8%、10 % ,表明hIL 18中 12 6、130、134位的天冬氨酸 (Asp)对其功能是必需的