水痘-带状疱疹病毒糖蛋白gE在昆虫细胞中的表达鉴定及其晶体培养

作     者：姚巧缤 李婷婷 荣芮 张玉云 李泽凯 薛文辉 李瑾瑾 朱瑞 程通 顾颖 夏宁邵 李少伟 YAO Qiao-bin;LI Ting-ting;RONG Rui;ZHANG Yu-yun;LI Ze-kai;XUE Wen-hui;LI Jinjin;ZHU Rui;CHENG Tong;GU Ying;XIA Ning-shao;LI Shao-wei

作者机构：厦门大学生命科学学院国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心福建厦门361102 厦门大学公共卫生学院分子疫苗学与分子诊断学国家重点实验室 

出 版 物：《中国病原生物学杂志》 (Journal of Pathogen Biology)

年 卷 期：2019年第14卷第5期

页      面：505-510页

核心收录：

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(No.81871648) 新药创制专项项目(No.2018ZX09711003-005) 

主　　题：水痘-带状疱疹病毒 糖蛋白gE 杆状病毒-昆虫表达系统 晶体培养 硒代甲硫氨酸 

摘      要：目的利用杆状病毒-昆虫表达系统建立纯化水痘带状疱疹病毒(VZV)包膜糖蛋白gE的方法,筛选gE蛋白的晶体培养条件,以期用于结构解析。方法将VZV糖蛋白gE基因序列克隆至杆状表达载体pAcgp67B载体中,利用High FiveTM昆虫细胞表达gE蛋白并进行TALON亲和层析纯化;利用WAVE生物波浪反应器建立含硒代甲硫氨酸的gE蛋白方法,以便在晶体结构解析中利用单波长或多波长异常散射进行相位解析;通过分子排阻色谱、分析超离,差示扫描量热法和酶联免疫吸附试验等分析gE蛋白的理化性质;利用结晶试剂盒对gE498和gE354蛋白的结晶条件进行初筛。结果获得的gE498和gE354蛋白纯度约为90%、产量为8~10 mg/L。理化分析显示两种gE蛋白在溶液中主要以均一稳定的单体形式存在,并呈现出良好的反应原性。在gE354晶体初筛中获得3个结晶条件:CrystalH3、PEGH12和IndexB10。结论建立了VZV糖蛋白gE表达和纯化方法,制备的蛋白纯度高,且具有反应原性,并筛选出CrystalH3、PEGH12和IndexB10这3个结晶条件,为gE糖蛋白的结构与功能研究及新型疫苗开发奠定了基础。