表达绿色荧光蛋白的MVA重组毒株的构建及筛选

作     者：黄彩云 赵志荀 朱学亮 王战红 吴香草 吴国华 张志东 张强 HUANG Caiyun;ZHAO Zhixun;ZHU Xueliang;WANG Zhanhong;WU Xiangcao;WU Guohua;ZHANG Zhidong;ZHANG Qiang

作者机构：中国农业科学院兰州兽医研究所农业农村部畜禽病毒学重点开放实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室 

出 版 物：《中国畜牧兽医》 (China Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2019年第46卷第7期

页      面：2079-2087页

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家重点研发计划子课题(2017YFD0502306-5) 国家自然科学基金项目(31872449) 

主　　题：绿色荧光蛋白(GFP) 痘苗病毒MVA株 重组毒株 

摘      要：为了构建及筛选表达绿色荧光蛋白(GFP)的改良型痘苗病毒安卡拉(MVA)重组毒株,并对其进行鉴定,本研究基于同源重组原理设计引物,通过PCR扩增获取含有MVA两侧同源臂的外源基因GFP片段,将GFP基因片段转染到感染了MVA的CEF细胞中使之同源重组到MVA ORF086-087位点(基因组中70303-70304 bp之间),利用倒置荧光显微镜观察并标记表达GFP的单个噬斑,筛选获取重组毒株,应用倒置荧光技术、PCR及Western blotting对该重组毒株进行鉴定。结果显示,经过3轮噬斑筛选,在倒置荧光显微镜下可观察到大量表达GFP的单个噬斑,PCR扩增检测结果表明目的基因已成功整合到重组毒株MVA-GFP中。Western blotting结果表明,GFP在感染的细胞内成功表达。本研究利用基因工程技术成功获得表达GFP的重组毒株MVA-GFP,可为进一步将其他抗原基因插入GFP位点中筛选无标记的重组毒株及疫苗研究提供材料。