多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗构建及其表达效率

作     者：李文桂 王鸿 朱佑明 LI Wen-gui;WANG Hong;ZHU You-ming

作者机构：重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所400016 

出 版 物：《中国地方病学杂志》 (Chinese Jouranl of Endemiology)

年 卷 期：2006年第25卷第5期

页      面：490-493页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

基　　金：教育部重点项目(205131) 重庆市教委科研基金(KJ050313) 重庆市科委科研基金(03-43-8) 重庆市卫生局科研基金(03-2-099) 

主　　题：多房棘球绦虫 重组BCG—EmⅡ/3疫苗 构建 表达效率 

摘      要：目的 构建多房棘球绦虫（Em）重组卡介苗（BCG—EmⅡ／3）疫苗，分析EmⅡ／3分子在该疫苗中的表达效率。方法 超声粉碎泡球蚴组织提取总RNA，通过RT-PCR扩增EmⅡ／3的抗原编码基因；将该基因定向克隆到大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭表达载体pBCG，构建重组质粒pBCG—EmⅡ／3；电穿孔法转化BCG，构建多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ／3疫苗。免疫印迹分析重组BCG-EmⅡ／3疫苗的表达产物。结果 RT-PCR成功扩增出1680bp的EmⅡ／3抗原编码基因；双酶切证实EmⅡ／3抗原编码基因成功插入pBCG中；PCR证实rBCG—EmⅡ／3疫苗构建成功；免疫印迹分析发现重组BCG—EmⅡ／3疫苗的表达产物在相对分子质量（Mr）约为65×10^3处有明显的目的蛋白表达条带，且能被活动性泡球蚴病鼠血清特异识别。结论 成功构建了多房棘球绦虫重组BCG—EmⅡ／3疫苗，为疫苗的开发和利用打下了坚实的理论基础。