四环素调控表达的反义bcl-2对人神经母细胞瘤细胞系SK-N-MC生长和凋亡的作用

作     者：关健 陈杰 赵和 

作者机构：中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院病理科北京100730 

出 版 物：《中华病理学杂志》 (Chinese Journal of Pathology)

年 卷 期：2002年第31卷第2期

页      面：135-139页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：国家杰出青年基金资助项目 ( 396 2 5 0 12 ) 国家教委跨世纪人才基金资助项目 

主　　题：四环素 反义bcl-2 SK-N-MC 神经母细胞瘤 脱噬作用 bcl-2基因 肿瘤细胞培养 细胞凋亡 

摘      要：目的 研究由四环素调控的反义bcl 2的表达对人神经母细胞瘤细胞系SK N MC细胞的生长和凋亡的作用并初步探讨其相关机制。方法 非定向克隆构建携带反义bcl 2cDNA片段的由四环素调控表达的真核细胞表达载体PUCCOMB1CMV/Asbcl 2 ;应用脂质体LipofectamineTM 介导转染SK N MC细胞 ,同时以空载体转染细胞作为对照。MTT法研究细胞的生长和增殖状况 ,提取DNA梯带和应用流式细胞术检测凋亡细胞。逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)研究细胞凋亡中bcl xL/bcl xS 基因在mRNA水平上表达的变化。Western杂交检测bcl 2及其上下游相关基因caspase 3、PARP的变化。结果 转染反义bcl 2的细胞生长增殖缓慢 ,在去血清培养的相同的时间内其凋亡细胞数也明显多于对照组细胞 ,提前出现DNA梯带。在细胞的凋亡过程中检测到非活性caspase 3酶原蛋白减少并检测到bcl 2、PARP蛋白的降解产物条带。但bcl xL/bcl xS 基因在mRNA水平上表达无明显改变。结论反义bcl 2mRNA可抑制SK N MC细胞的生长和增殖 ,促进去血清培养所诱导的SK N MC细胞的凋亡。在细胞凋亡过程中caspase 3被激活 ,bcl 2和PARP蛋白被裂解 ,但bcl xL/bcl xS 在反义bcl 2mRNA诱导的SK N MC细胞的凋亡过程中无变化。