p21 RNAi的pSUPER载体的构建及功能鉴定

作     者：贾玉红 马天舒 姜妙娜 李淑艳 贾弘禔 JIA Yu-hong;MA Tian-shu;JIANG Miao-na;LI Shu-yan;JIA Hong-ti

作者机构：大连医科大学病理生理学教研室辽宁大连116044 大连市中医研究所辽宁大连116013 北京大学医学部生物化学与分子生物学系北京100191 

出 版 物：《现代生物医学进展》 (Progress in Modern Biomedicine)

年 卷 期：2009年第9卷第12期

页      面：2243-2245,2309页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

主　　题：p21 pSUPER RNAi 神经元 载体 

摘      要：目的:构建抑制p21基因表达的pSUPER RNAi载体(pSUPER-p21)并鉴定其功能。方法:化学合成一对编码短发夹RNA序列的、靶向大鼠p21基因的寡核苷酸链,各60个碱基,退火,克隆到经BglⅡ、HindⅢ双酶切的pSUPER质粒上,构建重组RNAi质粒(pSUPER-p21)。通过双酶切鉴定及测序分析验证构建效果。将正确构建的质粒转染大鼠原代培养皮质神经元,western blotting检测经红藻氨酸处理的神经元中p21蛋白表达。结果:pSUPER-p21载体经双酶切鉴定及测序分析,结果表明60个碱基成功插入到预计位点,并且序列完全一致。Western blotting结果证实pSUPER-p21载体可特异性抑制红藻氨酸诱导的原代培养皮质神经元中p21蛋白表达的上调。结论:靶向p21的pSUPER RNAi载体构建成功,该载体可特异性抑制p21基因表达。