大鼠心内神经节胆碱乙酰转移酶阳性神经元——免疫组织化学法研究

作     者：赵小明 李光千 殷树仪 祝善乐 

作者机构：华中科技大学同济医学院解剖学教研室武汉430030 

出 版 物：《四川解剖学杂志》 (Sichuan Journal of Anatomy)

年 卷 期：2001年第9卷第2期

页      面：106-页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100101[医学-人体解剖与组织胚胎学] 10[医学] 

主　　题：胆碱乙酰转移酶 阳性神经元 免疫组织化学法 大鼠 胆碱能神经元 常规石蜡包埋 腹腔麻醉 枸橼酸缓冲液 阴性反应 心房肌 

摘      要：应用ABC免疫组织化学技术对大鼠心内神经节胆碱乙酰转移酶阳性神经元进行了研究,发现大鼠心脏心房后壁神经节内存在着胆碱乙酰转移酶(Ch AT)免疫阳性神经元.材料与方法,成年大鼠10只,雌雄不限,体重150克左右,0 .4%戊巴比妥纳腹腔麻醉,经左心室0.9%Nacl灌洗,4%多聚甲醛300ml( pH7.2磷酸缓冲液),灌注固定.取心房后壁,后固定12hr,常规石蜡包埋,切片厚5μm,切片脱蜡至水,用SABC法免疫组织化学反应:切片于3%H2O210 min,D》W洗3次×2min,0.01M枸橼酸缓冲液(pH6.0)微波修复(1 00℃)10min,冷却后抗原修复液10min,D》W洗3次×2min,ABB封闭1hr,D》W洗3次×2min,牛血清(1:50)30min,ChAT一抗(1 :2000)4℃18h,PBS洗3次×2min,生物素化绵羊IgG(1:1000 )37℃20min,PBS洗3次×2min,亲合素辣根过氧化物酶(1:200)3 7℃20min,PBS洗4×5min,DAB呈色(苏木素轻度复染).结果显示:在心房后壁心外膜下的心房肌层或/和心内神经节有ChAT阳性神经元.其形态多为椭圆形或圆形,中等大小,个别大于40μm,核大偏位.用牛血清和PBS分别代替ChAT一抗 ,结果均为阴性反应.讨论:在胆碱能神经的研究中,AChE一直作为一种重要的组织化学显示方法,但由于AChE显示胆碱能神经的特异性不强,因此,尽管用AchE显示心内神经节中胆碱能神经元的研究已有许多报道,但对这些AchE阳性神经元是否即是胆碱能神经元,至今尚存争议.而用胆碱乙酰转移酶(ChAT)显示胆碱能神经元在心内神经节的研究至今未见报道.业已证实ChAT只能在胞浆内合成,是神经递质ACh的标志酶 .本实验用免疫组织化学的方法,发现心内副交感神经节有ChAT阳性的神经元,表明该类型心内神经细胞存在胆碱乙酰转移酶,因此是合成ACh的神经元.本实验为研究心内胆碱能神经元提供了更为直接的证据.