基于丝状支原体丝状亚种P35反应原性的验证及其间接ELISA方法的建立

作     者：闫磊 潘巧 赵雅芝 郝文君 李媛 辛九庆 YAN Lei;PAN Qiao;ZHAO Ya-zhi;HAO Wen-jun;LI Yuan;XIN Jiu-qing

作者机构：吉林农业大学动物科技学院吉林长春130118 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物支原体病创新团队黑龙江哈尔滨150069 

出 版 物：《中国预防兽医学报》 (Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine)

年 卷 期：2019年第41卷第7期

页      面：716-720页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：牛羊重要疫病诊断与检测新技术研究项目基金(2016YFD0500900) 

主　　题：牛传染性胸膜肺炎 丝状支原体丝状亚种 间接ELISA 

摘      要：为建立检测丝状支原体丝状亚种(Mmm)的间接ELISA方法,本研究利用生物信息学软件对Mmm的全基因组序列进行了分析,选定大小为540bp的0584基因,该基因是编码分子量为35ku的脂蛋白,并对其免疫反应原性进行研究。利用原核表达系统获得了0584基因的重组蛋白rP35,以牛传染性胸膜肺炎(CBPP)阳性血清为一抗进行western blot分析,试验结果为阴性,但Dot-blot试验结果为阳性,证明该蛋白可能是Mmm特有的一种构象依赖性免疫相关蛋白且具有反应原性。以rP35蛋白为包被抗原,通过反应条件优化初步建立了检测CBPP血清抗体的间接ELISA方法,特异性为88.0%,敏感性为89.8%,批内和批间变异系数均小于10%,与商品化试剂盒符合率为84.8%。本研究为研制CBPP血清检测试剂盒提供了一种候选蛋白。