人胰岛素样生长因子ⅡP4启动子调控胸苷激酶载体的构建

作     者：周鸿科 杨冬华 汤绍辉 黄卫 ZHOU Hong-ke;YANG Dong-hua;TANG Shao-hui;HUANG Wei

作者机构：暨南大学附属第一医院消化科广州510630 

出 版 物：《中华肝脏病杂志》 (Chinese Journal of Hepatology)

年 卷 期：2011年第19卷第6期

页      面：460-463页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(30070853) 广东省医学科研基金(A2008368) 

主　　题：癌 肝细胞 胸苷激酶 治疗 

摘      要：目的探讨人胰岛素样生长因子Ⅱ（IGF-Ⅱ）P4启动子调控单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV-tk）／丙氧鸟苷（GCV）自杀基因系统体外对人肝癌细胞的选择性杀伤效应。方法用分子生物学方法构建IGF-ⅡP4启动子和巨细胞病毒启动子（CMV）调控下HSVtk与增强型绿色荧光蛋白（EGFP）融合基因穿梭质粒，并用脂质体转染法将其转入肝癌细胞系HepG2及宫颈癌细胞系HeLa细胞中，在荧光显微镜下观察荧光表达情况。加入GCV使总浓度分别为0、1．0、10．0和100．0μg／ml，用四甲基偶氮唑盐实验检测HSV-tk／GCV系统对各种细胞的杀伤作用，用RTPCR法检测转染前后胸苷激酶（tk）和EGFPmRNA的表达情况。用方差分析进行统计学处理。结果酶切鉴定和测序分析证实重组质粒构建成功；转染此穿梭质粒的细胞中仅有HepG2细胞检测到绿色荧光；RT-PCR检测到tk和EGFP的mRNA仅在HepG2细胞中表达；pDC316tkEGFP-CMV和pDC316-tkEGFPP4转染的HepG2细胞均出现明显的细胞生长抑制现象，两者转染细胞的抑制率分别为6．95％±0．67％、24．99％±1．53％、49．68％±1．68％和71．85％±3．28％，4．83％±0．35％、17．34％±1．15％、30．17％±1．30％和40．39％±0．82％，转染后者对HepG2细胞的抑制率低（F=24．055，P〈0．05），pDC316-tkEGFPCMV转染的HeLa细胞也出现明显的细胞生长抑制现象，其抑制率分别是6．36％±0．83％、23．95％±1．72％、45．13％±1．64％和69．38％±3．17％，转染质粒pDC316-tkEGFP-P4的HeLa细胞未发现明显的细胞抑制现象。结论成功构建IGF-ⅡP4启动子调控携带tk与EGFP融合基因穿梭质粒载体，转染后对人肝癌细胞系HepG2有选择性杀伤作用，为进一步靶向性肝癌腺病毒基因治疗奠定基础。