CEA siRNA载体的构建和转染人食管癌EC9706细胞的沉默作用

作     者：郑红 赵国强 杨洪艳 刘康栋 冯龙 董子明 ZHENG Hong;ZHAO Guo-Qiang;YANG Hong-Yan;LIU Kang-Dong;FENG Long;DONG Zi-Ming

作者机构：郑州大学基础医学院病理生理学教研室河南郑州450052 郑州大学基础医学院微生物免疫学教研室河南郑州450052 

出 版 物：《第四军医大学学报》 (Journal of the Fourth Military Medical University)

年 卷 期：2007年第28卷第23期

页      面：2116-2118页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：教育部科技创新工程重点项目(207150) 

主　　题：EC9706细胞系 小干扰RNA 癌胚抗原 

摘      要：目的:应用RNA干扰技术,构建针对CEA的siRNA载体,抑制人食管癌EC9706细胞CEA基因的表达.方法:依据设计siRNA的原则,针对人CEA的mRNA序列,设计并合成编码siRNA的两对寡核苷酸序列,经退火成互补双链,克隆入载体pRNAT-U6.2中构建重组体pRNAT-U6.2-CEA,筛选、鉴定.然后转染重组体至人食管癌EC9706细胞中,经G418筛选,获得阳性克隆,并以空质粒转染和未进行转染的EC9706作对照,运用PCR和Western Blot检测CEA的表达.结果:测序鉴定证实目的寡核苷酸片断已被克隆到pRNAT-U6.2载体中,pRNAT-U6.2-CEA转染人食管癌EC9706细胞后,CEA基因表达在mRNA和蛋白质水平都受到显著抑制.结论:成功构建了针对人食管癌EC9706细胞的siRNA载体,可有效抑制CEA的表达,为进一步从分子水平探讨CEA的功能奠定了基础.