黄芪甲苷联合5-氮胞苷诱导MSCs分化为心肌样细胞的实验研究

作     者：孙敬和 冼绍祥 黄习文 秦佳佳 王陵军 杨忠奇 SUN Jinghe;XIAN Shaoxiang;HUANG Xiwen;QIN Jiajia;WANG Lingjun;YANG Zhongqi

作者机构：广州中医药大学第一附属医院广州510405 暨南大学医学院广州510632 

出 版 物：《中药新药与临床药理》 (Traditional Chinese Drug Research and Clinical Pharmacology)

年 卷 期：2012年第23卷第4期

页      面：431-434页

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30472273 81173438) 

主　　题：黄芪甲苷 5-氮胞苷 骨髓间充质干细胞 心肌细胞 

摘      要：目的探讨黄芪甲苷(AST)与5-氮胞苷(5-aza)联合应用对骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为心肌样细胞的影响。方法采用贴壁培养法分离大鼠MSCs,流式细胞仪检测MSCs表面抗原CD34和CD44。分组诱导培养4周:I组(空白对照组)、II组(100 mg/L AST+5μmol/L 5-aza)、III组(10μmol/L 5-aza)、IV组(5μmol/L 5-aza)。利用免疫荧光法对诱导后细胞进行鉴定,观察心肌特异性结构蛋白cTnT、Desmin的表达,计算诱导分化率。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测诱导后MSCs中心钠素(ANP)mRNA的表达水平;以ELISA法检测诱导后细胞内环磷酸腺苷(cAMP)的水平。结果大鼠MSCs细胞表面抗原CD34阴性,CD44阳性;药物诱导后细胞形态发生显著变化,AST联合5-aza诱导能高效表达心肌特异性蛋白cTnT、Desmin,诱导分化率别为8.33%,18.00%。提高ANP mRNA的表达水平,亦能显著增加诱导后细胞内cAMP的含量。其作用效果与5μmol/L 5-aza诱导组比较,具有显著性差异(P0.05)。结论黄芪甲苷联合5-氮胞苷能在体外成功诱导MSCs分化为心肌样细胞,可使5-aza最佳诱导浓度从10μmol/L降至5μmol/L,而诱导效果不变。AST联合5-aza诱导后细胞与正常心肌细胞不仅形似,更具备相似的生理功能。