拟南芥CDR6基因过表达载体构建及过量表达植株筛选鉴定

作     者：董万春 樊婷婷 阳立波 江海坤 张其安 方凌 倪娇娇 管灵霞 曹树青 

作者机构：合肥工业大学生物与食品工程学院安徽合肥230009 安徽省农业科学院园艺研究所安徽合肥230009 

出 版 物：《安徽农业科学》 (Journal of Anhui Agricultural Sciences)

年 卷 期：2015年第43卷第13期

页      面：63-64,104页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 0828[工学-农业工程] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：安徽省自然科学基金青年基金项目(1308085QC56) 安徽省科技攻关项目(1201a0301009) 

主　　题：拟南芥 CDR6基因 过量表达载体 转基因植株 

摘      要：[目的]以拟南芥为材料克隆CDR6基因,构建CDR6基因的过量表达载体并筛选鉴定获得过表达植株。[方法]提取拟南芥mRNA,反转录成c DNA,并以此为模板克隆CDR6基因CDS全长,通过限制性内切酶切割、T4DNA连接酶连接,将CDR6基因CDS全长连接到带有35S强启动子的p XB094载体上;然后转化至Trans1-T1感受态细胞中,菌落PCR鉴定阳性单克隆并测序确认。将重组质粒转化至根瘤农杆菌GV3101菌株,通过浸花法侵染拟南芥野生型植株,通过抗性筛选和鉴定获得预期的转基因植株。[结果]菌落PCR鉴定和测序结果表明CDR6基因已成功构建至p XB094载体;通过抗性筛选并鉴定获得了过量表达阳性植株。[结论]筛选和鉴定获得的过量表达植株为研究CDR6基因的分子功能奠定了基础。