抗人脂多糖结合蛋白氨基端片段抗体dsFv V_L链的构建、表达和鉴定

作     者：葛晓冬 邹佳 杨艳丽 刘友生 GE Xiao-dong;ZOU Jia;YANG Yan-li;LIU You-sheng

作者机构：第三军医大学西南医院病理学研究所重庆400038 

出 版 物：《第三军医大学学报》 (Journal of Third Military Medical University)

年 卷 期：2007年第29卷第14期

页      面：1364-1367页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(30400426) 第三军医大学科研创新基金(2004) 

主　　题：脂多糖结合蛋白氨基端片段 二硫键稳定性Fv抗体 半胱氨酸 

摘      要：目的将抗人脂多糖结合蛋白氨基端片段(NH-LBP)抗体的Fv L链引入半胱氨酸(Cys),并表达、纯化。方法应用mega-primer PCR方法,在抗NH-LBP单克隆Fab抗体的轻链基因骨架区中引入编码Cys的基因序列,将目的序列放入载体pET-28a(+),于工程菌BL21star(DE3)中表达及TALON柱芯亲合纯化,通过ELISA法初步鉴定其与NH-LBP的结合力。结果dsFv VL链的Thr21替换为Cys,扩增出基因片段长约为650bp,经BL21star(DE3)菌表达出相对分子质量约为28×103的目的蛋白,与NH-LBP具有一定的结合力。结论抗体轻链中成功引入了Cys。