猪急性腹泻综合征冠状病毒核衣壳蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

作     者：周芝海 谭耀荣 郑瑶瑶 曾繁文 麦凯杰 马静云 ZHOU Zhi-hai;TAN Yao-rong;ZHENG Yao-yao;ZENG Fan-wen;MAI Kai-jie;MA Jing-yun

作者机构：华南农业大学动物科学学院广东广州510642 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2019年第49卷第9期

页      面：1179-1186页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：广州市科技计划项目(201904010433) 

主　　题：猪急性腹泻综合征冠状病毒 N蛋白 原核表达 多克隆抗体 

摘      要：为了制备猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)核衣壳(N)蛋白多克隆抗体,采用PCR方法扩增SADS-CoV/CN/GDGL/2017毒株N基因片段,并对N基因的序列以及N蛋白氨基酸突变位点进行分析。随后,将N基因片段克隆到原核表达载体pET-32a(+)构建重组质粒,测序验证后转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行原核表达,用Ni-NTA亲和层析柱纯化N蛋白,通过免疫BALB/c小鼠获得多克隆抗体。结果表明,扩增的N基因片段和所构建的重组质粒正确无误,成功诱导表达出可溶性重组蛋白SADS-CoV-N,分子质量约为67 ku,最佳诱导时间为6 h。Western-blot以及间接免疫荧光试验结果表明,该多克隆抗体能特异性检测SADS-CoV,证明重组蛋白有良好的免疫原性。本研究为后续建立SADS-CoV快速诊断方法及该病毒致病机制的深入研究奠定基础。