血吸虫重组卡介苗-Sj26GST疫苗的构建及免疫原性的研究

作     者：戴五星 皇甫永穆 郑波 程继忠 黄翠华 黄海浪 

作者机构：同济医科大学实验医学研究中心医学分子生物学研究室武汉30030 武汉市白沙洲医院 

出 版 物：《中华医学杂志》 (National Medical Journal of China)

年 卷 期：2000年第80卷第6期

页      面：407-410页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

基　　金：总理基金!(94Y19) 国家自然科学基金!(39480 022)资助项目 

主　　题：日本血吸虫 疫苗 合成 基因表达 免疫原性 

摘      要：目的 构建含日本血吸虫相对分子质量为 2 6 0 0 0的抗原 (Sj2 6GST)基因的重组卡介菌(rBCG)疫苗 ,观察其对BALB/c小鼠的免疫保护作用。方法 采用分子生物学技术 ,将Sj2 6GSTcDNA克隆到人结核杆菌热休克蛋白 (HSP) 70启动子下游 ,构成融合基因 ,再将此融合基因亚克隆到E .coli 分枝杆菌穿梭质粒pBCG 2 0 0 0中 ,构成重组质粒pBCG Sj2 6 ,然后转化卡介苗 (BCG) ,构成血吸虫重组BCG Sj2 6GST(rBCG Sj2 6GST)疫苗 ,经热诱导 ,在BCG中表达Sj2 6GST抗原。用rBCG Sj2 6GST疫苗皮下免疫BALB/c小鼠 ,以淋巴细胞刺激指数 (SI)反映细胞增殖能力 ,以NO释放量检测巨噬细胞吞噬活性 ,以ELISA试剂盒检测血清及脾淋巴细胞培养上清的白细胞介素 (IL) 2和干扰素 (IFN) γ的含量。结果 HSP70启动子与Sj2 6GSTcDNA融合基因已被克隆到pBCG 2 0 0 0穿梭表达质粒中 ,相对分子质量为 2 6 0 0 0处可见明显的表达蛋白带 ,其表达量占菌体总蛋白量的 15 %。rBCG Sj2 6GST疫苗以 10 6菌落形成单位 (CFU)经皮下免疫小鼠后 ,其脾SI为 2 .2 6± 0 .43,与对照组 (1.6 1± 0 .2 8) ,载体组(1.48± 0 .30 )和BCG组 (1.42± 0 .2 6 )比较 ,P 0 .0 5 ;巨噬细胞NO的含量为 35 7nmol/ml± 84nmol/ml,与对照组 (183nmol/ml± 33nmol/ml)和?