耐碱性甘露聚糖酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达

作     者：谭秀华 武玉永 马立新 蒋思婧 TAN Xiu-hua;WU Yu-yong;MA Li-xin;JIANG Si-jing

作者机构：湖北大学生命科学学院分子微生物与基因工程实验室武汉430062 滨州医学院细胞生物学教研室滨州256603 

出 版 物：《微生物学报》 (Acta Microbiologica Sinica)

年 卷 期：2005年第45卷第4期

页      面：543-546页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家"863计划"(2002AA2270117) 国家"十五"科技攻关(2004BA713B04-05) 湖北省自然科学基金(2003ABA118) 

主　　题：甘露聚糖酶,克隆,毕赤酵母,表达,酶活 

摘      要：通过功能平板从土壤中筛选得到含甘露聚糖酶基因的耐碱菌株。构建其基因组文库,从中筛选到甘露聚糖酶基因TM1并测序分析,用BLAST分析表明,TM1的氨基酸序列与其他在GenBank发表的甘露聚糖酶的氨基酸序列的同源性均低于60%,故确定其为一个新的甘露聚糖酶基因(GenBank登录号为AY623903)。将此基因去除信号肽后的编码序列克隆到表达载体pHBM905C上,得到重组质粒pHBM1201。经SalⅠ酶切后分别转化毕赤酵母(Pichiapastoris)KM71、GS115、SMD1168,得到分泌表达的重组毕赤酵母。挑选相对表达量最高的重组毕赤酵母SMD1168-3在摇瓶中诱导产酶,对该酶的粗酶进行酶学性质分析表明,其最适反应温度为55℃,最适PH值为7.5,以魔芋粉为底物所测得的最高酶活为41.8U,半衰期为1h,在80℃保温5min其酶活由最初酶活的77%下降到11%,温度下降到55℃后活性可恢复到最初酶活的60%以上。