福美双诱发肉鸡胫骨软骨发育不良早期生长板消减cDNA文库的构建

作     者：宁官保 田文霞 王瑞 覃平 乔建钢 李宏全 李家奎 毕丁仁 潘思轶 郭定宗 NING Guan-bao;TIAN Wen-xia;WANG Rui;QIN Ping;QIAO Jian-gang;LI Hong-quan;LI Jia-kui;BI Ding-ren;PAN Si-yi;GUO Ding-zong

作者机构：山西农业大学动物科技学院 华中农业大学动物医学院 华中农业大学食品科技学院 华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室 

出 版 物：《中国农业科学》 (Scientia Agricultura Sinica)

年 卷 期：2011年第44卷第4期

页      面：829-834页

核心收录：

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：山西省自然科学基金(2009011043-1) 山西农业大学博士科研启动基金 中国博士后科学基金(20080430984) 国家自然科学基金(30571370,31072179) 

主　　题：消减cDNA文库 胫骨软骨发育不良 福美双 抑制消减杂交(SSH) 差异表达基因 

摘      要：【目的】为应用cDNA芯片技术筛选肉鸡胫骨软骨发育不良(TD)时序性差异表达基因,本研究构建了早期生长板消减cDNA文库。【方法】将7日龄AV肉鸡随机分为两组,对照组(control,C)饲以基础日粮,试验组(thiram diet-fed,T)饲以基础日粮添加福美双100 mg·kg-1,2 d后继续饲以基础日粮,诱发肉鸡TD。应用抑制消减杂交技术(SSH)构建正反向消减cDNA文库,用PCR验证两个文库中克隆的插入片段,随机抽取100个阳性克隆测序,对所测序列同源性分析和功能预测。【结果】从两个文库共获得2 227个有效阳性克隆,插入片段大小主要分布在200—1 000bp之间;所测序列中有97条ESTs与GenBank中的鸡基因序列同源性达到99%,且非冗余度达到68.7%;此外,有3条ESTs未找到同源序列。这些基因具有构成细胞外基质,参与软骨内骨化和骨的重构,调节骨发育,行使信号转导、血管发生,参与电子传递及能量代谢等功能。【结论】成功构建了消减cDNA文库,将为进一步点制cDNA芯片,筛选不同阶段的差异表达基因奠定了基础,也为肉鸡TD机理研究提供新线索。