地衣芽孢杆菌耐高温α-淀粉酶基因的克隆、烟草瞬时表达及转化拟南芥的研究

作     者：李潇 孙海彦 阮孟斌 王霈虹 彭明 Xiao Li;Haiyan Sun;Mengbin Ruan;Peihong Wang;Ming Peng

作者机构：海南大学海口570228 中国热带农业科学院热带生物技术研究所海口571101 北京市科学技术情报研究所北京100048 

出 版 物：《植物学报》 (Chinese Bulletin of Botany)

年 卷 期：2015年第50卷第3期

页      面：354-362页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家高技术研究发展计划重点项目(No.2012AA101204) 国家自然科学基金(No.31000029) 海南省自然科学基金(No.ZDFD 20120765) 海南省引进集成应用专项(No.YJJC2011004) 海南省研究生创新科研课题(No.Hyb2011-4) 海南省重大科技项目(No.ZDZX2013023-1) 

主　　题：地衣芽孢杆菌 耐高温α-淀粉酶基因 烟草瞬时表达 拟南芥 

摘      要：从地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)中克隆到耐高温α-淀粉酶基因全长,构建了原核表达载体,转入大肠杆菌(Escherichia coli)中,使用IPTG于28℃诱导6小时后,通过SDS-PAGE检测到目的蛋白,分子量约为55 kDa,并通过酶活力检测实验证明该蛋白具有耐高温α-淀粉酶活性。同时构建了该基因融合GFP的植物表达载体,通过农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导瞬时转化烟草(Nicotiana tabacun)下表皮细胞并在荧光显微镜下观察,发现在烟草下表皮细胞的细胞质和液泡中均有绿色荧光。使用I_2-KI溶液对乙醇脱色后的烟草叶片进行染色,显色反应表明在烟草中表达的耐高温α-淀粉酶具有酶活性。最后,采用农杆菌介导的花蕾浸泡法将重组载体转化到拟南芥(Arabidopsis thaliana)中,筛选到稳定遗传的耐高温α-淀粉酶基因的拟南芥纯合子。研究结果为后期开展表达耐高温α-淀粉酶的转基因植物的相关研究奠定了实验基础。