人诱导性多能干细胞源性小胶质细胞诱导方法的建立及其表型和功能的初步研究

作     者：任巧 张林 蒋宁 周文霞 

作者机构：军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所 抗毒药物与毒理学国家重点实验室 南京中医药大学 

出 版 物：《中国药理学与毒理学杂志》 (Chinese Journal of Pharmacology and Toxicology)

年 卷 期：2019年第10期

页      面：867页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100101[医学-人体解剖与组织胚胎学] 10[医学] 

基　　金：国家重点研发计划(2016YFC1306300) 

主　　题：人诱导性多能干细胞 小胶质细胞 

摘      要：目的建立人诱导性多能干细胞（hiPSC）诱导分化为小胶质细胞（hiMGL）的方法,研究hiMGL的表型及功能。方法按照本实验室前期建立的hiPSC向小胶质细胞诱导分化的方法,将健康老年人来源的外周血细胞重编程的hiPSC诱导分化为hiMGL。利用免疫荧光法检测小胶质细胞特异性表达蛋白TMEM119,Image Pro plus软件分析TMEM119阳性细胞率;分别采用LPS 0.5,1,2,4 mg·L-1和H2O25,25,125,625μmol·L-1刺激hiMGL 24 h后,应用CCK8法检测细胞活力;采用中性红检测细胞的吞噬功能。结果hiMGL表达小胶质细胞特异性表面标记物TMEM119,hi MGLs TMEM119阳性率为78%。在LPS 0.5～4 mg·L-1刺激下,hiMGL细胞活力和吞噬能力与Control组相比均有升高,在LPS 2 mg·L-1刺激下活力上升最为明显（P0.05）;在LPS 1,2 mg·L-1刺激下吞噬功能增强最为明显（P0.05）。在H2O25-125μmol·L-1刺激下,hi MGL细胞活力无明显改变,吞噬功能增强;在H2O225μmol·L-1的刺激下其吞噬功能与Control组相比增强最为明显（P0.01）;H2O2625 mol·L-1刺激下hiMGL活力和吞噬能力都明显下降（P0.01）。结论本实验室诱导分化的hiMGL能够表达小胶质细胞特异性标记蛋白TMEM119,面对炎性刺激和氧化应激刺激其活力及吞噬功能均可受到影响。该结果提示,hiMGL在一定程度上具备小胶质细胞的表型及功能,为后续应用hiMGL研究神经退行性疾病奠定研究基础。