重组腺病毒AdE-SH2-Caspase8对耐伊马替尼的K562/G01细胞凋亡的影响

作     者：王林 费嫦 黄峥兰 李会 刘张玲 冯文莉 WANG Lin;FEI Chang;HUANG Zheng-Lan;LI Hui;LIU Zhang-Lin;FENG Wen-Li

作者机构：湖南医药学院检验医学院湖南怀化418000 重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室重庆400016 

出 版 物：《中国实验血液学杂志》 (Journal of Experimental Hematology)

年 卷 期：2015年第23卷第4期

页      面：976-981页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(30871102) 湖南省教育厅科研项目(15C0991) 湖南医药学院科研项目(2015008) 

主　　题：细胞凋亡 慢性粒细胞白血病 BCR-ABL融合蛋白 SH2结构域 Caspase 8 K562/G0 

摘      要：目的:研究表达融合蛋白SH2-Caspase 8的重组腺病毒Ad E-SH2-Caspase 8-HA-GFP(SC)对BCR/ABL阳性的耐伊马替尼的K562/G01细胞凋亡的影响。方法:K562/G01细胞经重组的腺病毒SC感染后,分别设突变Ad E-SH2m-Caspase 8-HA-GFP(Sm C)组、病毒空载Ad EGFP(CM V)组和PBS对照组。荧光显微镜和流式细胞仪(FCM)检测病毒感染效率,Western blot检测融合蛋白SH2-Caspase 8-HA的表达水平,光学显微镜观察经瑞氏染色后的细胞形态,FCM和DNA梯度电泳检测细胞凋亡情况,Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase3和PARP的表达水平。结果:重组腺病毒在K562/G01细胞中的感染效率较高;Western blot能检测到目的蛋白SH2-Caspase 8-HA的表达;与对照组比较,瑞氏染色后SC组出现明显的凋亡形态改变,FCM检测结果表明SC组早前凋亡细胞明显增高(P0.05),DNA梯度电泳检测结果发现SC组出现明显细胞凋亡特异性的梯度条带,Western blot结果表明SC组凋亡相关蛋白Caspase 3、PARP活化片段的表达水平升高。结论:重组腺病毒SC表达的SH2-Caspase 8融合蛋白能明显诱导K562/G01细胞的凋亡。