TaqMan-MGB探针检测文森巴尔通体博格霍夫亚种实时荧光定量PCR方法的建立及应用

作     者：栗冬梅 宋秀平 王君 刘起勇 

作者机构：中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室世界卫生组织媒介生物监测与管理合作中心北京102206 

出 版 物：《微生物学报》 (Acta Microbiologica Sinica)

年 卷 期：2013年第53卷第9期

页      面：976-983页

核心收录：

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 090601[农学-基础兽医学] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：十二五重大专项"重大传染病应急处置检测技术平台"课题(2011ZX10004-001) 

主　　题：巴尔通体 荧光定量PCR TaqMan-MGB探针 犬 SCAR标记 

摘      要：【目的】应用TaqMan-MGB探针技术,建立具有种水平特异性、高敏感性的荧光定量PCR方法,用于快速检测文森巴尔通体博格霍夫亚种。【方法】在序列特异性扩增区标记(Sequence characterized amplifiedregion,SCAR)技术基础上,依据文森巴尔通体博格霍夫亚种一段特有的基因序列设计探针和引物,分别优化扩增反应的退火温度、探针和引物的反应浓度;分析此方法的特异性、敏感性及重复性;绘制标准曲线,评估PCR反应的扩增效率和稳定性。【结果】本研究设计的TaqMan-MGB探针具有种水平特异性;最低检出限为每个PCR反应11个拷贝;组内和组间的变异系数CV值分别为0.12%-0.70%和0.14%-0.55%,在允许范围内;标准曲线线性关系良好(R2=1),扩增效率高(E=104.7%)。【结论】本研究建立的基于TaqMan-MGB探针技术的荧光定量PCR方法能够在种水平特异性、高灵敏度检出文森巴尔通体博格霍夫亚种,为这种巴尔通体所引起的一系列疾病的早期快速诊断、监测和流行病学调查等研究提供有效手段。