新加坡石斑鱼虹彩病毒ORF086蛋白的原核表达、纯化及抗体制备

作     者：夏立群 张红莲 梁海鹰 刘森林 XIA Li-qun;ZHANG Hong-lian;LIANG Hai-ying;LIU Sen-lin

作者机构：广东海洋大学水产学院广东湛江524025 中山大学生命科学学院广东广州510275 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088 

出 版 物：《上海海洋大学学报》 (Journal of Shanghai Ocean University)

年 卷 期：2010年第19卷第1期

页      面：1-6页

学科分类：0710[理学-生物学] 0908[农学-水产] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：广东省自然科学基金(06104920) 

主　　题：新加坡石斑鱼虹彩病毒 原核表达 多克隆抗体 SGIV ORF086重组蛋白 

摘      要：新加坡石斑鱼虹彩病毒(Singapore grouper iridovirus,SGIV)是导致石斑鱼养殖严重经济损失的主要病原体。本研究构建了含有新加坡石斑鱼虹彩病毒(Singapore grouper iridovirus,SGIV)ORF086基因的重组表达质粒载体pET32a-ORF086,将其转化到大肠杆菌中进行融合表达,经SDS-PAGE分析和Western blot鉴定,证实重组大肠杆菌融合表达了SGIV ORF086蛋白。经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isoprophl-thio-β-D-galactopyranoside,IPTG)浓度、诱导温度、诱导时间等诱导表达条件的优化,确定在0.7 mmol/L IPTG、16℃诱导14 h时可溶性SGIV ORF086重组蛋白占重组蛋白的60%。经镍琼脂糖凝胶柱纯化重组蛋白,纯化度达95%以上。用纯化的SGIV ORF086蛋白免疫小鼠,获得了高效特异的SGIV ORF086抗血清。