猪RUVBL2真核表达载体的构建及其在CHO细胞中的表达

作     者：徐桢 陈云 卫恒习 李莉 孟立 张守全 XU Zhen;CHEN Yun;WEI Hengxi;LI Li;MENG Li;ZHANG Shouquan

作者机构：华南农业大学动物科学学院国家生猪种业工程技术研究中心广东省农业动物基因组学与分子育种重点实验室 

出 版 物：《中国畜牧杂志》 (Chinese Journal of Animal Science)

年 卷 期：2020年第56卷第2期

页      面：146-150页

学科分类：0905[农学-畜牧学] 09[农学] 090501[农学-动物遗传育种与繁殖] 

基　　金：国家重点研发计划(2017YFD0501902) 国家自然科学基金(31572397和31402072) 广东省科技计划(2017A020208061) 

主　　题：猪 RUVBL2基因 真核表达载体 CHO细胞 

摘      要：RUVBL2(RuvB-like 2)蛋白是进化上高度保守AAA+(ATPases Associated With Diverse Cellular Activities,AAA)家族成员之一,CHO(Chinese Hamster Ovary)细胞被广泛地用于表达重组DNA蛋白。为探究猪睾丸组织的RUVBL2基因是否能够在CHO细胞中表达,本实验以猪睾丸组织的cDNA为模板,PCR扩增RUVBL2目的基因,并将其克隆至pIRES2-EGFP(Mammalian Expression Vectors pIRES2-EGFP)载体上,进一步转化到DH5α中,再进行PCR、酶切及测序鉴定;将重组质粒转染到CHO细胞中,再进行荧光、RT-PCR、Western blot检测。结果显示:PCR、酶切及测序都证实了RUVBL2基因正确地插入到了载体质粒pIRES2-EGFP的多克隆位点;荧光、RT-PCR、Western blot也证实了RUVBL2基因在CHO细胞中的成功表达。本实验成功构建了猪的pIRES2-EGFP-RUVBL2真核表达载体,并证实了猪睾丸组织中的RUVBL2基因能够在CHO细胞中表达。