白脂素包涵体表达纯化及其功能评价

作     者：韦雪静 敖青青 孟玲 徐怡璐 陆彩玲 唐深 王新航 李习艺 WEI Xuejing;AO Qingqing;MENG Ling;XU Yilu;LU Cailing;TANG Shen;WANG Xinhang;LI Xiyi

作者机构：广西医科大学公共卫生学院广西南宁530021 广西医科大学广西高校高发疾病预防与控制研究重点实验室广西南宁530021 广西医科大学基础医学院广西南宁530021 广西医科大学广西高校基础医学研究重点实验室广西南宁530021 

出 版 物：《南方医科大学学报》 (Journal of Southern Medical University)

年 卷 期：2020年第40卷第1期

页      面：67-72页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100104[医学-病理学与病理生理学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(81860585) 

主　　题：原核表达与纯化 包涵体 白脂素 糖原分解 血糖 

摘      要：目的构建白脂素的原核表达质粒,表达及纯化重组白脂素蛋白,并初步探索其功能,为进一步研究白脂素作用机制及其生理病理作用提供依据。方法利用基因工程技术构建表达白脂素BL21菌株,经异丙基硫代半乳糖苷诱导,梯度尿素复性,亲和层析纯化及去内毒素处理得到可用于细胞和动物实验的重组白脂素。采用血糖仪检测重组白脂素腹腔注射后C57小鼠血糖变化情况。Alamar Blue检测重组白脂素作用24 h对MIHA细胞活性的影响;重组白脂素刺激MIHA细胞24 h,用蒽酮法检测糖原含量。结果在37℃,A600 nm=0.8,IPTG终浓度为1 mmol/L诱导4 h目的蛋白表达效果较好。通过纯化和去内毒素处理,重组白脂素纯度大于95%,内毒素含量小于1 EU/mg,可以用于动物与细胞实验。腹腔注射重组白脂素60 min后C57小鼠血糖升高至峰值(重组白脂素组vs对照组P=0.021),120 min恢复到正常水平(重组白脂素组vs对照组P=0.03)。重组白脂素刺激MIHA细胞24 h,对细胞活性没有影响;检测糖原发现,不同浓度白脂素组糖原与对照组比较差异有统计学意义(P1=0.013,P2=0.036,P3=0.011)。结论通过原核表达系统成功表达及纯化了白脂素蛋白,该方法纯化后的白脂素具有降低MIHA细胞糖原含量及升高小鼠血糖的作用,这为白脂素功能的进一步研究提供了理论依据。