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内蒙古自治区呼和浩特市赛罕区大学西街235号 邮编: 010021
作者机构:中国医药工业研究总院国家上海新药安全评价研究中心 上海益诺思生物技术股份有限公司
出 版 物:《中国新药杂志》 (Chinese Journal of New Drugs)
年 卷 期:2020年第29卷第1期
页 面:42-47页
核心收录:
学科分类:1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100706[医学-药理学] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学]
基 金:国家“重大新药创制”科技重大专项资助项目(2018ZX09201017-008) 上海市科委工程技术研究中心(17DZ2252900) 上海市扬帆计划项目(16YF1411300)
摘 要:目的:建立并验证检测食蟹猴血清中游离IgE和总IgE浓度的酶联免疫吸附试验(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)方法。方法:游离IgE和总IgE浓度的检测均采用夹心法。采用FcεRI作为捕获试剂,并采用生物素标记的抗IgE多抗作为检测试剂进行游离IgE浓度的测定;对于总IgE的检测,捕获和检测试剂均为抗IgE多抗。该研究对检测方法的关键参数进行了优化并对该方法进行定量范围、精密度、准确度、回收率、稳定性、方法特异性、药物干扰试验等方面的方法学验证。结果:游离IgE和总IgE的定量范围均在6. 25~400 ng·m L-1,标准曲线样品复孔间变异(精密度,coefficient of variation,CV%)不超过20%,其中定量上限(upper limit of quantitation,ULOQ)和定量下限(lower limit of quantitation,LLOQ)不超过25%。相对偏差(relative deviation,RE%)不超过±20%,ULOQ和LLOQ不超过±25%。游离IgE检测方法的批内、批间精密度分别在0. 87%~9. 15%和4. 27%~6. 50%;检测总IgE方法的批内、批间精密度分别在0. 92%~11. 60%和7. 21%~17. 89%;游离IgE的回收率在76. 53%~88. 85%;总IgE的回收率分别在72. 77%~86. 93%。干扰试验结果表明,奥马珠单抗不影响总IgE的回收率水平。然而在游离IgE检测中,奥马珠单抗浓度的升高可以显著降低游离IgE的回收率水平。结论:本研究建立的食蟹猴血清中游离IgE和总IgE浓度的检测方法,可用于食蟹猴血清中游离IgE和总IgE浓度测定,为抗IgE抗体的临床前评价提供重要的数据支持。