食蟹猴血清中游离IgE和总IgE浓度检测方法的开发及验证

作     者：孙晓卉 满素勤 陈亚会 陈巨冰 朱晰 赵小平 程远国 马璟 SUN Xiao-hui;MAN Su-qin;CHEN Ya-hui;CHEN Ju-bing;ZHU Xi;ZHAO Xiao-ping;CHENG Yuan-guo;MA Jing

作者机构：中国医药工业研究总院国家上海新药安全评价研究中心 上海益诺思生物技术股份有限公司 

出 版 物：《中国新药杂志》 (Chinese Journal of New Drugs)

年 卷 期：2020年第29卷第1期

页      面：42-47页

核心收录：

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100706[医学-药理学] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：国家“重大新药创制”科技重大专项资助项目(2018ZX09201017-008) 上海市科委工程技术研究中心(17DZ2252900) 上海市扬帆计划项目(16YF1411300) 

主　　题：IgE 奥马珠单抗 酶联免疫吸附试验 方法学验证 

摘      要：目的:建立并验证检测食蟹猴血清中游离IgE和总IgE浓度的酶联免疫吸附试验(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)方法。方法:游离IgE和总IgE浓度的检测均采用夹心法。采用FcεRI作为捕获试剂,并采用生物素标记的抗IgE多抗作为检测试剂进行游离IgE浓度的测定;对于总IgE的检测,捕获和检测试剂均为抗IgE多抗。该研究对检测方法的关键参数进行了优化并对该方法进行定量范围、精密度、准确度、回收率、稳定性、方法特异性、药物干扰试验等方面的方法学验证。结果:游离IgE和总IgE的定量范围均在6. 25～400 ng·m L-1,标准曲线样品复孔间变异(精密度,coefficient of variation,CV%)不超过20%,其中定量上限(upper limit of quantitation,ULOQ)和定量下限(lower limit of quantitation,LLOQ)不超过25%。相对偏差(relative deviation,RE%)不超过±20%,ULOQ和LLOQ不超过±25%。游离IgE检测方法的批内、批间精密度分别在0. 87%～9. 15%和4. 27%～6. 50%;检测总IgE方法的批内、批间精密度分别在0. 92%～11. 60%和7. 21%～17. 89%;游离IgE的回收率在76. 53%～88. 85%;总IgE的回收率分别在72. 77%～86. 93%。干扰试验结果表明,奥马珠单抗不影响总IgE的回收率水平。然而在游离IgE检测中,奥马珠单抗浓度的升高可以显著降低游离IgE的回收率水平。结论:本研究建立的食蟹猴血清中游离IgE和总IgE浓度的检测方法,可用于食蟹猴血清中游离IgE和总IgE浓度测定,为抗IgE抗体的临床前评价提供重要的数据支持。