高效缺氧诱导表达载体的构建与鉴定

作     者：张翔 杨洁 丁蓉 陈锐 杜德伟 李占亭 赵晶 杨安钢 孙脊峰 ZHANG Xiang;YANG Jie;DING Rong;CHEN Rui;DU De-Wei;LI Zhan-Ting;ZHAO Jing;YANG An-Gang;SUN Ji-Feng

作者机构：第四军医大学生物化学与分子生物学教研室陕西西安710032 解放军第四五一医院特诊科陕西西安710054 第四军医大学唐都医院肾脏内科陕西西安710038 

出 版 物：《生物技术通讯》 (Letters in Biotechnology)

年 卷 期：2008年第19卷第2期

页      面：191-193页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家自然科学基金项目(30370622) 陕西省自然科学基金项目(2003c2052) 

主　　题：缺氧应答元件 最小CMV启动子 报告基因 缺氧诱导表达 

摘      要：目的:构建缺氧诱导表达载体,以介导报告基因在缺氧环境下的特异、高效表达。方法:通过分子生物学方法,将鼠磷酸甘油酸激酶基因的缺氧应答元件(HRE)和最小CMV(mCMV)启动子重组,构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)或萤光素酶报告基因的可诱导载体;通过酶切鉴定和测序分析,证实载体获得正确的构建;将重组载体转染HeLa细胞,观察EGFP荧光强度并检测萤光素酶活性。结果:HRE/mCMV启动子调控的报告基因载体具有特异和高效的诱导活性。结论:构建了可以进行特异和高效缺氧诱导的报告基因载体,为其进一步的开发和应用奠定了实验基础。