大鼠胚胎脑源性神经干细胞的分离培养和鉴定

作     者：唐巍 王键 胡建鹏 陈业农 韩小祥 程红 俞丽华 Tang Wei;Wang Jian;Hu Jian-peng;Chen Ye-hong;Han Xiao-xiang;Cheng Hong;Yu Li-hua

作者机构：安徽中医学院针灸骨伤临床学院康复教研室安徽省合肥市230038 安徽中医学院中医临床学院中医基础理论教研室安徽省合肥市230038 安徽中医学院中西医结合临床学院病理教研室安徽省合肥市230038 安徽中医学院中医临床学院安徽省合肥市230038 

出 版 物：《中国临床康复》 (Chinese Journal of Clinical Rehabilitation)

年 卷 期：2006年第10卷第11期

页      面：36-38,i0001页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100204[医学-神经病学] 10[医学] 

基　　金：安徽省自然科学研究项目基金(050430904) 安徽省教育厅自然科学研究项目基金(2006KJ382B) 北京中医药大学吕亚芳博士研究生科研资助基金 

主　　题：神经干细胞 增殖 分化 细胞培养 

摘      要：目的:分离培养大鼠胚胎脑源性神经干细胞,并进行增殖分化鉴定。方法:实验于2005-06/12在中国科学技术大学生命科学学院周江宁研究室进行。①自孕14dWistar大鼠胚胎分离大脑皮质及皮质下组织,经机械吹打分离成单细胞后,利用无血清原代及传代培养方法,在添加重组人碱性成纤维细胞生长因子、重组人表皮生长因子和B27添加剂的DMEM/F12(1∶1)培养基中进行悬浮培养,获得具有克隆能力的细胞群;用有限稀释法,得到来源于同一细胞的亚细胞系克隆。②从培养基中撤除生长因子和B27添加剂,换成含体积分数为0.1的胎牛血清的DMEM/F12培养基,将培养的细胞球接种于预先铺有多聚赖氨酸盖玻片的培养皿,诱导分化。③以免疫荧光细胞化学技术,用神经干细胞的特异性单克隆抗体(巢蛋白)和增殖细胞单克隆抗体(5-溴脱氧尿苷嘧啶)鉴定克隆细胞,以鉴定神经干细胞的自我更新增殖能力。④以免疫荧光细胞化学技术,用神经细胞的特异性抗体(神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白、半乳糖脑苷脂)鉴定分化细胞,以鉴定神经干细胞的多向分化潜能。结果:①从胎鼠大脑皮质及皮质下分离的组织,经原代和传代培养均可形成细胞克隆,并具有增殖的能力,表达神经上皮干细胞蛋白抗原和增殖细胞抗原。②在血清诱导下,分化后的细胞表达神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞3种神经细胞的特异性抗原。结论:运用上述方法分离培养的细胞具有自我更新和增殖能力,并具有多向分化潜能和具有神经干细胞的特异性抗原。