细胞工厂中F基因型腮腺炎病毒SP-A株在人二倍体细胞上的增殖研究

作     者：王微 邱恒 杨振清 丁开云 樊会青 李琦涵 王晶晶 WANG Wei;QIU Heng;YANG Zhen-qing;DING Kai-yun;FAN Hui-qing;LI Qi-han;WANG Jing-jing

作者机构：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 

出 版 物：《微生物学免疫学进展》 (Progress In Microbiology and Immunology)

年 卷 期：2020年第48卷第1期

页      面：63-68页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

基　　金：云南省科技人才和平台计划(2019HB073) 中国医学科学院医学与健康科技创新工程(2016-12M-1-019) 

主　　题：腮腺炎病毒 F基因型 病毒增殖 人二倍体细胞 细胞工厂 

摘      要：目的利用细胞工厂,探讨F基因型腮腺炎病毒SP-A株在KMB17细胞上的增殖特性,为腮腺炎疫苗的研制提供基础数据。方法分别以体积分数为10%、8%和5%的血清浓度将细胞培养至单层后,观察病毒接种后细胞病变情况,初步确定最低血清含量后;在不含血清培养基条件下,按照不同接种感染复数(multiplicity of infection,MOI)接种细胞,确定病毒增殖峰值后,进一步观察不同吸附条件对病毒增殖的影响;同时进行荧光实时定量PCR,验证病毒增殖变化。结果在体积分数为5%的血清条件下,细胞可生长成致密单层;高MOI(0.500)感染细胞后,在4~5 d内进入增殖高峰,中MOI(0.050)、低MOI(0.005)感染细胞后,在5~6 d进入增殖高峰,维持48 h后,呈现缓慢下降趋势;在比较37℃吸附试验中,非吸附组病毒增殖高峰明显迟于吸附组,荧光实时定量PCR检测结果显示在病毒感染细胞6 d时病毒载量达到峰值。结论5%新生牛血清即可获得生长状态良好的细胞,MOI对腮腺炎病毒在KMB17细胞株中的增殖有较大的影响,当使用适宜范围的MOI(0.01~0.02),在非吸附的条件下,腮腺炎病毒SP-A株在KMB17株中能够良好地增殖,在病毒培养至7~9 d可获得高滴度的病毒收获液。