多药耐药基因QRT-PCR检测中内标准DNA和RNA模板的构建

作     者：曹丽萍 王斌 郁知非 CAO Li-Ping WANG Bin YU Zhi-Fei (Department of Hematology, Liu Hua Bridge Hospital Guangzhou 510010) Department of Immunology, Sun Yat-Sen University of Medical Sciences ,Guangzhou 510089 Department of Hematology, Medical College, Jinan University, Guangzhou 510632

作者机构：广州流花桥医院血液科广州510010 中山医科大学免疫学教研室广州510089 暨南大学医学院血液病研究室广州510632 

出 版 物：《中国实验血液学杂志》 (Journal of Experimental Hematology)

年 卷 期：1997年第5卷第4期

页      面：393-398页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

基　　金：广东省重点攻关项目(粤科计字1996/58) 自然科学基金(950899) 

主　　题：多药耐药基因 定量逆转录多聚酶链反应 DNA模板 RNA模板 白血病 

摘      要：利用多药耐药基因(MDR1)全基因质粒和分子克隆技术,经二次克隆将戊型肝炎病毒一段238bP的核苷酸序列插入MDR1 308 bp的目的 cDNA片段,构建了插入突变型MDR1-cDNA重组体作为定量PCR的DNA竞争模板;再经第三次克隆构建了插入突变型MDR1-RNA重组体,最后经体外转录出546 nt的正链RNA作为逆转录的RNA竞争模板。所建立的定量逆转录-多聚酶链反应(QRT-PCR)技术简便、快速、灵敏,可检出1fg水平的MDR1 mRNA,为临床MDR1表达的定量检测提供了确实可行的手段。