基于A1E3及B1C4单克隆抗体检测日本血吸虫循环抗原ELISA法的建立及现场初步应用

作     者：蔡玉春 陈韶红 田利光 储言红 卢艳 陈木新 艾琳 周洋 陈家旭 CAI Yu-chun;CHEN Shao-hong;TIAN Li-guang;CHU Yan-hong;LU Yan;CHEN Mu-xin;AI Lin;ZHOU Yang;CHEN Jia-xu

作者机构：中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所卫生部寄牛虫病原与媒介牛物学重点实验室世界卫生组织疟疾、血吸虫病和丝虫病合作中心上海200025 

出 版 物：《中国血吸虫病防治杂志》 (Chinese Journal of Schistosomiasis Control)

年 卷 期：2014年第26卷第1期

页      面：42-45,89页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：国家重大科技专项(2008ZX10004011、2012ZX10004220) 

主　　题：日本血吸虫 可溶性虫卵抗原 单克隆抗体 酶联免疫吸附试验 

摘      要：目的建立基于A1E3及B1C4单克隆抗体检测日本血吸虫循环抗原的夹心酶联免疫吸附试验(ELISA),并对其应用情况进行初步评价。方法采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹试验(Western blotting)对A1E3及B1C4单克隆抗体进行特性分析,用ELISA法测定B1C4、A1E3单克隆抗体效价。采用棋盘格滴定法确定双单抗夹心ELISA法检测循环抗原的最佳工作浓度。在最佳条件下,分别检测20份急性血吸虫病病人血清、46份慢性血吸虫病病人血清及20份正常人血清,评价其检测敏感性和特异性。用建立的双单抗夹心ELISA法和市售检测血吸虫循环抗原的ELISA试剂盒检测湖北省江陵县IHA阳性血吸虫病病人血清72份,以评估双单抗夹心ELISA法的检测效能。结果经SDS-PAGE和Western blotting分析,纯化后的A1E3及B1C4在相对分子质量(Mr)88 000和52 000处各有一条清晰重链,在Mr20 000处有一条相同的轻链,且A1E3及B1C4可与可溶性虫卵抗原(SEA)及急性血吸虫病病人血清发生特异性反应。B1C4单抗效价可达1∶105,A1E3单抗效价可达1∶30 000。用B1C4、A1E3双单抗夹心ELISA法检测急、慢性血吸虫病病人血清阳性率分别为100%和86.9%,检测20份正常人血清特异性为100%。双单抗夹心ELISA法及市售ELISA试剂盒检测日本血吸虫循环抗原阳性率分别为45.8%及43.1%。结论成功建立了基于A1E3及B1C4双单抗夹心ELISA法,该法检测日本血吸虫循环抗原具有较高的敏感性及特异性。