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内蒙古自治区呼和浩特市赛罕区大学西街235号 邮编: 010021
作者机构:上海实验动物研究中心上海市实验动物质量监督检验站上海201203
出 版 物:《中国畜牧兽医》 (China Animal Husbandry & Veterinary Medicine)
年 卷 期:2015年第42卷第6期
页 面:1389-1395页
学科分类:0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种]
基 金:上海市科委基金项目(12140900500、14140900600)
主 题:三重PCR 金黄色葡萄球菌 绿脓杆菌 肺炎克雷伯杆菌
摘 要:本研究旨在建立一种能同时检测金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,***)、绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa,***)、肺炎克雷伯杆菌(Klebsiella pneumoniae,***)的三重PCR检测方法。根据金黄色葡萄球菌nuc基因、绿脓杆菌toxR基因、肺炎克雷伯杆菌PhoE基因设计并合成引物,在单一PCR条件基础上优化建立三重PCR反应条件,并进行特异性、敏感性和重复性分析及与细菌分离培养的比对试验。结果显示,3对引物均能特异性扩增出目的条带,大小分别为484、278和368bp。最佳退火温度在56~59℃之间,引物浓度均为0.2μmol/L,dNTP浓度为200μmol/L,Mg2+浓度为2.5mmol/L。3种细菌间无交叉反应。对支气管鲍特杆菌等其他8种实验动物常见致病菌均无交叉反应。最低能同时检测到10-5 ng/μL的细菌基因组DNA。3次重复结果一致,表明建立的三重PCR方法重复性好。同时采用细菌分离培养法和三重PCR方法对30份实验小鼠样本进行检测,对比结果显示三重PCR方法检出率略高于细菌分离培养法,细菌分离培养法呈阳性的样品,三重PCR方法均能检出。结果表明,本试验建立的三重PCR检测方法具有特异、敏感、高效等优点,为实验动物细菌快速检测和流行病学调查提供了技术支持。