基于CRISPR/Cas9技术快速构建PRV gE基因缺失病毒

作     者：金铭 刘春羽 张洪亮 杭天宇 孙雨茗 赵洪哲 乌冬高娃 李伊铭 张赫 王凤雪 温永俊 Jin Ming;Liu Chunyu;Zhang Hongliang;Hang Tianyu;Sun Yuming;Zhao Hongzhe;Wudonggaowa;Li Yiming;Zhang He;Wang Fengxue;Wen Yongjun

作者机构：内蒙古农业大学兽医学院农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018 

出 版 物：《中国动物检疫》 (China Animal Health Inspection)

年 卷 期：2020年第37卷第5期

页      面：87-93页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：内蒙古农业大学协议引进人才项目(NDGCC2016-22) 

主　　题：伪狂犬病毒 变异毒株 糖蛋白E基因 CRISPR/Cas9 

摘      要：为快速、高效构建伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)糖蛋白E基因(gE)缺失病毒,基于CRISPR/Cas9基因编辑技术,首先将pSpCas9(BB)-2A-GFP荧光质粒转染至VERO细胞和PK-15细胞,选出转染效率较高的细胞系,同时于http://***/网站设计并合成3个高评分的小导向RNA(small guide RNA,sgRNA),通过噬斑形成试验,筛选出高效sgRNA。其次将筛选出的针对PRV gE基因的sgRNA转染于PK-15细胞,然后接种PRV-1病毒,经过5轮噬斑克隆纯化获得PRV-1-ΔgE。结果显示:VERO细胞比PK-15细胞具有更好的转染效果;gE-sgRNA1和gE-sgRNA2可作为针对gE基因的高效sgRNA;获得了1株PRV gE基因缺失291 bp的病毒,将其命名为PRV-1-ΔgE。研究表明,CRISPR/Cas9基因编辑技术可作为一种高效编辑PRV-1缺失病毒基因的方法,同时也为后续快速应对PRV变异株研究提供了新思路。