H2O2氧化-荧光分析法测定乌骨鸡黑色素细胞中黑色素含量

作     者：陈露露 田颖刚 CHEN Lu-lu;TIAN Ying-gang

作者机构：南昌大学食品科学与技术国家重点实验室江西南昌330047 南昌大学生物质转化教育部工程研究中心江西南昌330047 

出 版 物：《光谱学与光谱分析》 (Spectroscopy and Spectral Analysis)

年 卷 期：2020年第40卷第5期

页      面：1595-1600页

核心收录：

学科分类：081704[工学-应用化学] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-化学工程与技术] 070302[理学-分析化学] 0703[理学-化学] 

基　　金：国家自然科学基金地区科学基金项目(21162018) 食品科学与技术国家重点实验室自由探索课题(SKLF-ZZB-201520)资助 

主　　题：乌骨鸡 黑色素细胞 黑色素含量 荧光分析法 

摘      要：建立一种简单、准确、灵敏度高的测定乌骨鸡黑色素细胞中黑色素含量的荧光分析法。黑色素不发荧光,一旦在强烈的氧化条件下(在碱性过氧化氢中加热)被氧化后就会发出强烈的荧光,通过测量其相对荧光强度来测定细胞中黑色素的含量。利用荧光分光光度计在带宽为5 nm,扫描速度为2400 nm·min^-1,扫描间距为1 nm的条件下确定乌骨鸡黑色素的激发波长和发射波长。通过单因素实验筛选浓度范围在10~100μg·mL^-1的乌骨鸡黑色素的最佳氧化条件,对该方法的线性范围、检测限、仪器精密度、重复性等结果进行分析评价。向A375细胞(无黑色素的人的黑色素瘤细胞)样品中分别加入25,40和80μg·mL^-1黑色素标准品,在最佳氧化条件下进行反应后测定细胞样品中黑色素含量。计算测定值与理论值的相对误差值,意在探究细胞中杂蛋白和脂质对黑色素定量结果的影响;向乌骨鸡黑色素细胞样品中分别加入5.00,7.50和10.00μg的黑色素标准品,按照最佳氧化条件测定其细胞样品中总黑色素含量,并计算其加标回收率。结果表明:乌骨鸡黑色素的激发波长为354 nm,发射波长为453 nm;乌骨鸡黑色素最佳氧化条件为:pH为8,氧化温度为55℃,过氧化氢浓度范围为24%~26%,氧化时间为2 h;黑色素浓度在10~100μg·mL^-1范围内与相对荧光强度呈良好线性关系,相关系数r=0.9974,线性回归方程为b=0.0147a+0.3138,荧光分析法的方法检出限为0.30μg·mL^-1,紫外分光光度法的方法检出限为3.68μg·mL^-1;精密度实验的RSD值为1.87%,重复性实验的RSD值为4.59%;在A375细胞中加入不同质量的黑色素标准品后,测量值与理论值的相对误差分别为2.78%,3.53%和0.25%;在乌骨鸡黑色素细胞中加入不同黑色素标准品后,测得的加标回收率分别为95.94%,92.14%和99.83%,RSD值为4.00%;综上所述,该方法简单、准确、稳定、检测限低,且测定结果不受细胞内杂蛋白以及脂质的干扰,更适用于测定乌骨鸡黑色素细胞中黑色素的含量。