肾癌G250基因和hGM-CSF基因双顺反子表达质粒的构建及鉴定

作     者：李科 李君武 苏泽轩 刘艳 LI Ke;LI Jun-wu;SU Ze-xuan;LIU Yan

作者机构：暨南大学附属第一医院泌尿外科广东广州510630 暨南大学医学院微生物与免疫教研室广东广州510632 

出 版 物：《中国现代医学杂志》 (China Journal of Modern Medicine)

年 卷 期：2009年第19卷第8期

页      面：1176-1179,1182页

学科分类：0710[理学-生物学] 1002[医学-临床医学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 100214[医学-肿瘤学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 10[医学] 

基　　金：广东省"十一五"医学重点专科基金[2008(粤卫)50号] 

主　　题：肾癌 G250 hGM-CSF 基因佐剂 

摘      要：目的应用分子生物学技术,构建pIG250-GM双顺反子真核表达质粒并进行测序鉴定。方法从肾癌组织中提取总RNA,采用RTPCR技术扩增肾癌G250抗原的基因编码区序列,同时从质粒pORF-hGM-CSF中扩增出基因佐剂hGM-CSF,分别克隆到真核表达载体pIRES的多克隆位点A(MCSA)和B(MCSB)中,构建pIG250-GM真核表达质粒,并进行酶切鉴定。结果酶切鉴定提示插入的基因片段大小分别为1.44kμ和0.47kμ,测序分析表明克隆的G250和hGM-CSF序列与GenBank上公布序列完全一致。结论成功构建双顺反子表达pIGM-G250质粒,为研究G250-GMCSF基因负载的DC疫苗防治肾癌提供了必要的实验基础。