马泰勒虫RAP-1基因的原核表达及蛋白性质分析

作     者：肖培培 张梦圆 特列克·库拉别克 刘世芳 宋晶晶 樊新丽 李敏 张杨 Xiao Peipei;Zhang Mengyuan;Telieke·Kulabieke;Liu Shifang;Song Jingjing;Fan Xinli;Li Min;Zhang Yang

作者机构：新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052 新疆维吾尔自治区动物卫生监督所新疆乌鲁木齐830063 中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所云南分所药理中心云南景洪666100 西双版纳州傣药南药重点实验室云南景洪666100 

出 版 物：《中国动物检疫》 (China Animal Health Inspection)

年 卷 期：2020年第37卷第7期

页      面：104-111页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：新疆维吾尔自治区高校科研计划项目(XJEDU2017S014) 

主　　题：马泰勒虫 RAP-1蛋白 原核表达 性质 结构 

摘      要：棒状体相关蛋白1(rhoptry-associated protein 1,RAP-1)是由棒状体分泌的与侵袭宿主细胞相关的蛋白。本研究以顶复门原虫RAP-1基因为靶标,用最大似然法构建了巴贝斯属、疟原虫属、泰勒虫属的RAP-1基因进化树;应用软件预测分析RAP-1蛋白的理化性质、亲疏水性、跨膜区以及二、三级结构,并表达纯化了马泰勒虫(Theileria equi)RAP-1重组蛋白。结果显示:巴贝斯属不同虫株相聚类,测定序列与马泰勒虫聚为一支,又与恶性疟原虫相聚类,表明亲缘关系较近。马泰勒虫RAP-1蛋白理论等电点为9.85,半衰期为30 h,总平均亲水性(GRAVY)为-0.368,无跨膜区;RAP-1蛋白二级结构中,α-螺旋、β-折叠、β-转角和无规卷曲占比分别为38.5%、15.5%、27.8%、18.1%;构建的三级结构立体展现了RAP-1蛋白形态。成功构建了原核表达载体pET-32a-RAP-1;该重组蛋白主要以包涵体形式存在,蛋白大小为65 kDa。RAP-1蛋白可通过原核表达系统高效表达,纯化后的产物能被马泰勒虫标准阳性血清识别,具有良好的反应原性。本研究为深入了解马泰勒虫入侵宿主的机制机理以及RAP-1蛋白的功能研究奠定了基础。