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利用增强型绿色荧光蛋白基因作筛选标记克隆载体的构建及鉴定

Construction and identification of a screening vector using enhanced green fluorescent protein(EGFP) as an indicator

作     者:唐金宝 陈永 梁淑娟 王焕芹 李青春 

作者机构:潍坊医学院基础医学部 潍坊医学院免疫学教研室 

出 版 物:《中国海洋药物》 (Chinese Journal of Marine Drugs)

年 卷 期:2009年第28卷第2期

页      面:28-31页

学科分类:1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

基  金:山东省科技攻关计划项目(2008GG10002022 2008GG20071000) 国家自然科学基金(30772497) 山东省卫生高层次人才1020工程专项经费 校青年教师科研基金(KQ07010) 

主  题:增强型绿色荧光蛋白 大肠杆菌 阳性克隆 筛选载体 

摘      要:目的构建以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为筛选标记的新型pUC18筛选载体。方法将EGFP基因克隆至pUC18载体的PstI/HindⅢ位点,构建筛选载体pUC18-EGFP,并验证pUC18-EGFP能否利用EG-FP的荧光特性筛选出含基因重组体的阳性克隆。结果经酶切和基因测序鉴定pUC18-EGFP载体构建正确;在外源基因插入该载体后,对LB氨苄平板上的绿色菌落进行酶切和基因测序鉴定,结果证明LB平板上的绿色菌落即为含有重组质粒的克隆。结论成功构建pUC18-EGFP筛选载体,利用EGFP的绿色荧光可筛选出阳性克隆。

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