重组人L型丙酮酸激酶N末端单克隆抗体的制备与鉴定

作     者：廖婷婷 张晨阳 蒋小梅 魏大鹏 章崇杰 LIAO Ting-ting;ZHANG Chen-yang;JIANG Xiao-mei;WEI Da-peng;ZHANG Chong-jie

作者机构：四川大学华西基础医学与法医学院免疫学教研室成都610041 

出 版 物：《四川大学学报（医学版）》 (Journal of Sichuan University(Medical Sciences))

年 卷 期：2010年第41卷第4期

页      面：571-574页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

主　　题：单克隆抗体 重组人L型丙酮酸激酶 糖代谢 

摘      要：目的制备抗人L型丙酮酸激酶N末端(PK-N)的单克隆抗体并对其特异性进行鉴定。方法以PK-N-GST-tag表达蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,经多次筛选及克隆化,建立能稳定分泌抗PK-N单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用ELISA、Western blot、免疫组化对此单克隆抗体特性进行鉴定。结果筛选到两株能稳定分泌抗PK-N单克隆抗体的细胞株,亚类鉴定重链为IgG2b,轻链为kappa链。ELISA法测定腹水效价分别为1∶409600和1∶102400,抗体相对亲和力分别为3.54×108L/mol和2.72×108L/mol。Western blot显示抗体能特异识别免疫原和人肝细胞株HL-7702中的天然丙酮酸激酶蛋白。免疫组化进一步显示了其在细胞及组织中的定位,均匀的分布于细胞的胞浆中。结论成功制备了抗PK-N单克隆抗体。