牛PAI-1基因真核表达载体构建、生物信息学分析及功能初探

作     者：李锰 赵静 刘红羽 安雯 王军 吕文发 LI Meng;ZHAO Jing;LIU Hongyu;AN Wen;WANG Jun;LYU Wenfa

作者机构：吉林农业大学现代农业技术教育部国际合作联合重点实验室吉林长春130118 吉林农业大学动物生产与产品质量安全教育部重点实验室吉林长春130118 

出 版 物：《中国畜牧杂志》 (Chinese Journal of Animal Science)

年 卷 期：2020年第56卷第8期

页      面：184-189页

学科分类：0905[农学-畜牧学] 09[农学] 090501[农学-动物遗传育种与繁殖] 

基　　金：国家自然科学基金项目(31772600) 

主　　题：颗粒细胞 PAI-1基因 真核表达载体 细胞凋亡 

摘      要：本研究旨在构建牛纤溶酶原激活物抑制剂1(Plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)基因真核表达载体、生物信息学分析并对其功能进行初探。实验参照GenBank数据库公布的牛PAI-1基因的CDS序列信息设计引物,通过RT-PCR获得PAI-1基因片段,将基因片段与pMD-19-T载体连接转化DH5α感受态细胞,构建pMD-19-T-PAI-1克隆载体,双酶切回收基因片段,构建pcDNA3.1-PAI-1真核表达载体,经双酶切、测序鉴定构建成功。将表达载体转染至293T细胞,48 h后进行荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western Blot检测PAI-1以及凋亡相关基因Bcl2、Bax和Caspase-3的表达。结果显示:pcDNA3.1-PAI-1真核表达载体测序结果与GenBank数据库公布的牛PAI-1基因CDS序列完全匹配,生物信息学分析发现PAI-1基因编码区全长1 209 bp,编码402个氨基酸,存在35个潜在磷酸化位点,主要分布在细胞外。过表达PAI-1可显著提高293T细胞中PAI-1 mRNA和蛋白表达,抗凋亡基因Bcl2 mRNA和蛋白水平显著升高,促凋亡基因Bax和Caspase-3 mRNA和蛋白水平显著降低。