稳定表达人胰岛素原突变基因的HepG2细胞构建及其胰岛素分泌

作     者：郑宏庭 邓华聪 兰丽珍 方芳 刘金波 李丙蓉 蹇锐 ZHENG Hong-ting;DENG Hua-cong;LAN Li-zhen;FANG Fang;LIU Jin-bo;LI Bing-rong;JIAN Rui

作者机构：重庆医科大学附属第一医院内分泌科重庆400016 第三军医大学新桥医院内分泌科重庆400037 第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038 

出 版 物：《第三军医大学学报》 (Journal of Third Military Medical University)

年 卷 期：2007年第29卷第24期

页      面：2361-2363页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100101[医学-人体解剖与组织胚胎学] 10[医学] 

主　　题：mhPINS基因 逆转录病毒 HepG2细胞 胰岛素 

摘      要：目的构建稳定表达人胰岛素原突变(mutated human proinsulin,mhPINS)基因的HepG2细胞,将HepG2细胞改建为具有胰岛素分泌能力的胰岛代理细胞(artificial beta cell)。方法重组逆转录病毒载体pL-mhPINS-SN转包装细胞PA317,经G418筛选,NIH3T3细胞测定病毒滴度,获取高滴度的稳定产毒细胞克隆,以PCR进行鉴定。以mhPINS病毒感染HepG2细胞,经G418筛选,对HepG2/mhPINS细胞进行RT-PCR、Western blot、放免法鉴定,并行葡萄糖刺激的胰岛素分泌检测。结果所获HepG2/mhPINS细胞生长良好,RT-PCR获得286bp目的条带,Western blot检测可见34×103的特异性条带,放免法在其培养上清中检测到胰岛素与C肽,而HepG2/pLXSN细胞上述各项检测均为阴性。葡萄糖刺激的胰岛素分泌检测显示,HepG2/mhPINS细胞在不同葡萄糖浓度(0.1、10、20mmol/L)条件下引起的胰岛素分泌无显著性差异(P0.05)。结论成功构建稳定表达mhPINS基因的HepG2细胞,其内获得成熟胰岛素的表达与分泌,但其胰岛素分泌对葡萄糖刺激缺乏反应。