胶束毛细管电泳法检测IL-12的含量

作     者：包鹏举 孙瑶 王海华 金孝岠 张根葆 BAO Pengju;SUN Yao;WANG Haihua;JIN Xiaoju;ZHANG Genbao

作者机构：皖南医学院麻醉学院安徽芜湖241002 皖南医学院生理学教研室安徽芜湖241002 皖南医学院病理生理学教研室安徽芜湖241002 皖南医学院蛇毒研究所安徽芜湖241002 

出 版 物：《南方医科大学学报》 (Journal of Southern Medical University)

年 卷 期：2020年第40卷第9期

页      面：1301-1306页

核心收录：

学科分类：1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 10[医学] 

基　　金：安徽省高校科学研究基金重点项目(KJ2016A729) 皖南医学院重点科研项目培育基金(WK2016Z02) 皖南医学院重点项目科研基金(WK2019Z09) 

主　　题：胶束毛细管电泳 白介素-12 二硫键 

摘      要：目的建立胶束毛细管电泳法鉴定白介素-12(IL-12)、检测其含量并分析IL-12去折叠的过程。方法以50μm i.d.×48.5 cm未涂层毛细管为色谱分离柱,分析影响IL-12分离效果的因素并建立IL-12标准曲线;将IL-12与抗IL-12抗体混匀液在38℃水浴槽中孵育,40 min后在相同条件下进行毛细管电泳,将其与IL-12、抗IL-12抗体的电泳结果比较以鉴定IL-12;将IL-12与DTT在60℃水浴槽中孵育不同时间,并研究IL-12在不同状态下的电泳结果分析IL-12去折叠的过程。结果建立了以含30 mmol/L十二烷基硫酸钠(SDS)的硼酸盐(pH=9.3,80 mmol/L)为缓冲液的胶束毛细管电泳在线扫集法;IL-12的峰面积与质量浓度具有良好的线性关系,线性相关系数为0.9991,线性范围为2~120 ng/L;随着IL-12与DTT孵育时间的延长,IL-12的二硫键逐渐被打开,图谱中可显示蛋白峰随之发生的变化。结论毛细管电泳法操作简单、灵敏度高,这为今后在肿瘤等疾病中快速检测IL-12的含量以及分析其含量变化的原因提供理论依据。