大鼠肝细胞系lncRNA NONRATT021477.2过表达及干扰表达条件优化

作     者：牛春阳 薛琳琳 詹雪龙 徐晶 邵子益 郭景茹 甄莉 计红 李士泽 杨焕民 NIU Chun-yang;XUE Lin-lin;ZHAN Xue-long;XU Jing;SHAO Zi-yi;GUO Jing-ru;ZHEN Li;JI Hong;LI Shi-ze;YANG Huan-min

作者机构：黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 黑龙江职业学院黑龙江双城150111 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2020年第40卷第8期

页      面：1560-1565页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：黑龙江八一农垦大学研究生创新科研基金资助项目(YJSCX2018-Y30) 黑龙江八一农垦大学博士科研启动基金资助项目(XDB-2016-09) 中国博士后科学基金资助项目(2017M611404) 黑龙江省自然科学基金资助项目(C2015041) 

主　　题：lncRNA NONRATT021477.2 慢病毒过表达 ASO干扰 BRL细胞 

摘      要：试验分别以带有目的基因的重组慢病毒质粒(pSllV-CMV-zsGreen-puro-lncRNA77.2)和3条反义核苷酸质粒转染BRL细胞,根据绿色荧光蛋白(GFP)表达情况评估转染效率;优化过表达慢病毒的最佳感染复数,并通过嘌呤霉素筛选以得到高表达稳转株。应用荧光定量PCR方法检测lncRNA NONRATT021477.2的表达量,验证过表达效果及初步确定干扰效率最高的质粒,并进一步优化ASO质粒的转染浓度和时间曲线。结果显示,重组慢病毒以感染复数(MOI)=4转染BRL细胞48 h时,lncRNA NONRATT021477.2表达量比空病毒NC组极显著升高(P0.01),过表达效果为17倍,成功获得高表达稳转株;并且确定了干扰质粒ASO-2以250 nmol/L浓度转染BRL细胞24 h时,对靶基因水平的干扰效率最高,为78%。本试验建立了lncRNA NONRATT021477.2过表达和干扰表达质粒转染BRL细胞的最佳条件,为后续深入研究lncRNA NONRATT021477.2的生物学功能奠定基础。