猪ACRBP基因真核表达载体的构建及生殖系统表达验证

作     者：梁耀娣 陈云 赵坤 潘学情 张守全 LIANG Yaodi;CHEN Yun;ZHAO Kun;PAN Xueqing;ZHANG Shouquan

作者机构：华南农业大学动物科学学院广东广州510642 国家生猪种业工程技术研究中心广东广州510642 广东省农业动物基因组学与分子育种重点实验室广东广州510642 

出 版 物：《中国畜牧杂志》 (Chinese Journal of Animal Science)

年 卷 期：2020年第56卷第9期

页      面：176-181页

学科分类：0905[农学-畜牧学] 09[农学] 090501[农学-动物遗传育种与繁殖] 

基　　金：国家自然科学基金(31572397、31402072) 

主　　题：猪 ACRBP 酶切 真核表达载体 转染 Western-blot 

摘      要：本实验旨在获得带有增强型绿色荧光蛋白及表达猪ACRBP基因的pIRES2-EGFP-ACRBP真核表达载体和CHO细胞株,并且检测猪睾丸、附睾、前列腺、尿道球腺、精子、精清、性成熟母猪卵巢和输卵管中ACRBP蛋白的表达情况。本实验通过基因克隆的方法获得猪源ACRBP基因,并构建了pIRES2-EGFPACRBP真核表达载体,经过双酶切、测序鉴定后,转染CHO细胞,通过绿色荧光观察、RT-PCR和Westernblot检验ACRBP表达载体在CHO癌细胞株中的表达情况。结果显示:ACRBP蛋白在睾丸、附睾、前列腺、尿道球腺、卵巢、输卵管、精子中有条带,而在猪的精清中没有条带,转入CHO细胞后可观察到带荧光的阳性质粒,通过RT-PCR和Western-blot检测到ACRBP在CHO中得到了表达。