PTD-p53融合蛋白调控肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的研究

作     者：杨宇 薛秀琼 张露含 陈晓芳 王元元 王丹 郝军莉 Yang Yu;Xue Xiuqiong;Zhang Luhan;Chen Xiaofang;Wang Yuanyuan;Wang Dan;Hao Junli

作者机构：成都医学院生物科学与技术学院成都610500 

出 版 物：《成都医学院学报》 (Journal of Chengdu Medical College)

年 卷 期：2020年第15卷第6期

页      面：685-689页

学科分类：090502[农学-动物营养与饲料科学] 0905[农学-畜牧学] 09[农学] 

基　　金：四川省科技厅面上项目(No:21ZDYF2351) 四川省教育厅自科重点项目(No:17ZA0102、16ZA0287) 四川省卫生和计划生育委员会普及及应用项目(No:16PJ103、18PJ586) 四川省大学生创新创业项目(No:201513705082) 成都医学院科研创新团队项目(No:CYTD16-04) 

主　　题：原核表达 PTD-p53 细胞形态 细胞克隆 细胞凋亡 

摘      要：目的探究PTD-p53融合蛋白进入肝癌细胞,调控HepG2细胞增殖与凋亡的生物学功能。方法构建pET28a-PTD-p53原核重组载体,表达具有进入细胞能力的PTD-p53融合蛋白。SDS-PAGE电泳检测融合蛋白质量分数和特异性;蛋白质印迹技术检测融合蛋白跨膜能力;细胞形态学观察和流式细胞仪分析PTD-p53融合蛋白对肝癌细胞HepG2凋亡水平的影响;细胞克隆实验探讨PTD-p53融合蛋白对HepG2细胞的增殖调控。结果大肠杆菌表达的PTD-p53融合蛋白主要位于包涵体中,复性后的PTD-p53能够以浓度梯度方式进入HepG2细胞,细胞形态学观察和流式细胞仪检测结果表明,PTD-p53融合蛋白处理促进HepG2细胞凋亡;细胞克隆实验显示终质量浓度为1 mg/L或2.5 mg/L的PTD-p53处理HepG2细胞,以剂量依赖方式抑制HepG2细胞克隆形成。结论PTD-p53融合蛋白可以进入肝癌细胞,促进HepG2细胞凋亡,抑制细胞增殖,为进一步体内验证PTD-p53融合蛋白抑制肿瘤的效果奠定基础。