抗疟原虫单抗M26-32 IgM的单体化及其免疫学特性研究

作     者：陶志勇 徐岁 夏惠 顾亚萍 刘耀宝 方强 高琪 TAO Zhi-yong;XU Sui;XIA Hui;GU Ya-ping;LIU Yao-bao;FANG Qiang;GAO Qi

作者机构：蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030 江苏省寄生病防治研究所卫生部寄生虫病预防与控制技术重点实验室江苏省寄生虫分子生物学重点实验室无锡214064 

出 版 物：《中国人兽共患病学报》 (Chinese Journal of Zoonoses)

年 卷 期：2014年第30卷第6期

页      面：551-555,567页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：国家重大传染病防治科技重大专项(No.2012ZX10004-220) 安徽省高等学校省级自然科学研究重点项目(No.KJ2012A200) 卫生部寄生虫病预防与控制技术重点实验室开放课题(No.WK014-003) 蚌埠医学院科技发展基金重点项目(No.Bykf13A09) 

主　　题：疟疾 单克隆抗体 M26—32 IgM 胶体金 

摘      要：目的改造IgM类抗疟原虫单抗M26-32为单体IgM亚单位,胶体金标记天然和改造后两种M26-32用于检测疟原虫抗原。方法复苏培养M26-32杂交瘤细胞,接种BALB/c小鼠,收集含有单抗的腹水,用商品HiTrap IgM HP柱纯化腹水中的IgM抗体,并用L-半胱氨酸裂解IgM类M26-32单抗成单体IgM亚单位。经间接免疫荧光检定两种抗体的效价,并用胶体金标记,分别检测恶性疟原虫和间日疟原虫可溶性抗原。结果接种20只小鼠,共采集约80mL单抗腹水,经HiTrap IgM HP柱纯化,获得了纯度较高的M26-32单抗。经L-半胱氨酸裂解后,Native电泳显示天然IgM被裂解为单体亚单位,IFA结果显示,亚单位M26-32与天然五聚体IgM滴度无差别。经胶体金标记后,两种金标抗体均分别能检测1∶100稀释的恶性疟原虫和1∶10稀释的间日疟原虫可溶性抗原。结论建立了L-半胱氨酸裂解IgM类M26-32单抗为单体IgM亚单位及其胶体金标记的方法,为利用M26-32进一步制备相应快速诊断工具奠定基础。