莱菔硫烷对血管内皮细胞损伤的保护作用

作     者：黄睿 

作者单位：哈尔滨医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：孙长颢

授予年度：2013年

学科分类：081702[工学-化学工艺] 08[工学] 0817[工学-化学工程与技术] 

主      题：莱菔硫烷 同型半胱氨酸 血管内皮细胞损伤 Toll样受体-4 氧化应激 保护作用 

摘      要：目的:探讨莱菔硫烷(sulforaphane，SFN)对同型半胱氨酸(homocysteine，HCY)诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用。\n 方法:本研究应用人脐静脉细胞融合细胞***.926为体外实验模型。将***.926细胞用浓度为10 mmol/L的HCY诱导4h，再用浓度0μmol/L-20μmol/L的SFN处理12 h。采用噻唑蓝(MTT)法检测吸光度，并计算各组细胞黏附率;应用活性氧检测试剂盒方法检测细胞中ROS的荧光强度;采用蛋白印记法(Western blotting)检测***.926细胞中TLR-4、MyD88的总蛋白表达量和NF-κB、Nrf-2核蛋白表达量。\n 结果:10 mmol/L的HCY作用***.926细胞后，其黏附率明显增加，同时不同浓度的SFN均可抑制损伤后的***.926细胞的黏附，有剂量依赖性。ROS的检测结果显示，经10 mmol/L的HCY刺激后，细胞浆中ROS的荧光强度明显提高，而不同浓度SFN可以阻止损伤后的ROS荧光强度的表达，降低其对血管的氧化损伤。通过蛋白印记实验，提示我们HCY能明显增加细胞中TLR-4、MyD88和NF-κB的表达含量，分别为空白对照组的1.43倍、1.39倍和1.76倍;而经不同浓度的SFN处理后，表达量增高的TLR-4、MyD88和NF-κB蛋白均得到了明显抑制，同时SFN可能诱导Nrf-2的表达，并呈现剂量依赖关系。\n 结论:SFN对HCY诱导的***.926细胞炎症损伤和氧化应激均有抑制作用;其作用机制是SFN可以遏制TLR-4通路的活化，抑制炎症基因的转录，从而保护血管内皮细胞。