自噬和Rab9在APPswe/PS1dE9双转基因小鼠神经元变性中的作用

作     者：陈妍林 

作者单位：华中科技大学 

学位级别：硕士

导师姓名：张旻

授予年度：2013年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100203[医学-老年医学] 10[医学] 

主      题：阿尔茨海默病 APPswe/PS1dE9双转基因小鼠 旷场实验 新颖物体识别 老年斑 自噬 Rab9 波形蛋白 

摘      要：目的 以APPswe/PS1dE9双转基因小鼠为对象，研究Rab9及自噬在阿尔茨海默病神经元变性过程中的作用。 方法 1.采用PCR技术对小鼠基因型进行鉴定。 2.通过旷场实验和新颖物体探索实验分别对6月龄和12月龄Tg APPswe/PS1dE9转基因小鼠和同龄同性别野生型小鼠进行自主探索活动和情感变化的检测。 3.采用免疫组化和免疫荧光技术分别对12月龄Tg APPswe/PS1dE9转基因小鼠和野生型两组小鼠脑组织中Aβ116、LC3B、Rab9和Vimentin的表达进行检测。 4.采用免疫荧光技术对12月龄的Tg APPswe/PS1dE9转基因小鼠脑组织进行vimentin和硫磺素S双重标记以显示老年斑与vimentin阳性细胞的空间位置关系。 5.采用Western Blot技术分别对12月龄Tg APPswe/PS1dE9转基因小鼠和野生型小鼠脑组织中LC3B Ⅰ、LC3B Ⅱ、Rab9和Vimentin蛋白进行定量检测。 结果 1．在旷场实验中，6月龄Tg APPswe/PS1dE9双转基因小鼠的探索活性与对照组野生型小鼠相比无明显变化，且不存在焦虑倾向；12月龄时，Tg APPswe/PS1dE9转基因小鼠的探索活性降低且可能更具有焦虑倾向（P0.05）。 5. Vimentin主要分布在神经细胞核周及神经突起中。在12月龄的TgAPPswe/PS1dE9双转基因小鼠皮层区的老年斑周围可以见到vimentin阳性细胞聚集；而在海马区域，vimentin阳性细胞数则较同龄野生型小鼠明显减少（P=0.005）；脑组织中的viemntin总的表达水平较同龄野生型小鼠显著降低（P=0.0289）。 结论 APPswe/PS1dE9双转基因小鼠能够模拟AD患者的部分临床和病理表型，为AD的发病机制和治疗研究提供了有价值的工具。 自噬诱导的增加、Rab9和Vimentin的功能异常可能参与了AD的神经元变性过程。