CD137信号通过TRAF6/JNK/AP-1调控小鼠平滑肌细胞活化T细胞核因子c1表达

作     者：徐源 

作者单位：江苏大学 

学位级别：硕士

导师姓名：严金川

授予年度：2017年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

主      题：CD137 CD137L 活化T细胞核因子c1 血管平滑肌细胞 信号通路 

摘      要：目的探寻CD137-CD137L受体-配体互相作用是否通过TRAF6/JNK/AP-1信号通路影响小鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)活化T细胞核因子c(NFATc1)的表达。方法组织贴块法原代培育小鼠VSMC,取第4代细胞用于试验。VSMC分为6组:对照组、CD137激动组、CD137拮抗组、siTRAF6干预组、siJNK干预组及siAP-1干预组。各组TRAF6、磷酸化JNK(p-JNK)、磷酸化AP-1(p-AP-1)及NFATc1蛋白表达程度用Western blot检测。各组细胞TRAF6、p-JNK、p-AP-1及NFATc1的分布情况用免疫荧光法检测。TRAF6、JNK、AP-1采用小干扰RNA技术沉默表达。TRAF6、JNK、AP-1及NFATc1 mRNA水平的表达通过实时荧光定量PCR来测定;细胞凋亡和增殖情况采用流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)和CCK-8实验来检测。结果(1)CCK-8检测显示:CD137-CD137L信号激活后,血管平滑肌细胞可以发生明显的增殖。(2)与对照组比较,CD137激动组(CD137-CD137L信号激活)TRAF6、p-JNK、p-AP-1、NFATc1蛋白表达程度显著升高(P0.05);与CD137激动组比较,CD137拮抗组(CD137-CD137L信号抑制)TRAF6、p-JNK、p-AP-1、NFATc1蛋白表达程度显著降低(P0.05)。(3)采用siRNA技术分别沉默TRAF6、JNK、AP-1后,与CD137激动组比较,siTRAF6干预组TRAF6、p-JNK、p-AP-1、NFATc1表达显著减少(P0.05);siJNK干预组TRAF6表达无改变,而p-JNK、p-AP-1、NFATc1表达显著减少(P0.05);siAP-1干预组TRAF6、p-JNK表达无显著改变,而p-AP-1、NFATc1表达显著减少(P0.05)。(4)免疫荧光检测显示:CD137激动组TRAF6、p-JNK、p-AP-1、NFATc1荧光表达量升高(P0.05);CD137拮抗组TRAF6、p-JNK、p-AP-1、NFATc1荧光表达量明显降低(P0.05);siTRAF6干预组、siJNK干预组、siAP-1干预组TRAF6、p-JNK、p-AP-1、NFATc1荧光表达量与上述蛋白表达结果一致。(5)流式细胞术检测显示:CD137-CD137L信号激活后,血管平滑肌细胞的凋亡可以显著减少。结论***137-CD137L信号可通过TRAF6/JNK/AP-1通路影响活化T细胞核因子c1的表达。***137-CD137L信号改变可以影响小鼠平滑肌细胞的增殖。