缺氧对牙周炎大鼠模型CRP、sICAM-1及ICAM-1/LFA-1影响的研究

作     者：周霞 

作者单位：第三军医大学 

学位级别：硕士

导师姓名：刘鲁川

授予年度：2010年

学科分类：1003[医学-口腔医学] 100302[医学-口腔临床医学] 10[医学] 

主      题：缺氧 牙周炎 CRP sICAM-1 ICAM-I/LFA-1 

摘      要：背景 牙周炎(periodontal disease)是口腔两大类主要疾病之一,在世界范围内均有较高的患病率,在我国其患病率更居于龋病之上[1]。牙周炎会导致牙龈炎症、牙周袋形成、牙槽骨吸收以及牙齿松动,最终可导致牙齿脱落,是造成健康人失牙的最主要原因之一。高原环境缺氧、寒冷,气压较低,尤其是缺氧,引起红细胞数量增多,血液流变学发生“浓、粘、聚、凝的变化,容易导致微循环障碍,造成组织局部缺氧和防御能力的下降。有文献报道,WHO对35个国家统计资料表明,牙周炎患病率在50%左右,而在高原环境下牙周炎患病率明显高于平原人群(70.4%),而且移居人群随着移居时间的延长,其牙周炎患病率日趋上升,说明高原缺氧等恶劣环境是引起牙周炎患病率增高的重要原因之一。我国不同海拔高度均有居民,高原环境更加容易引发牙周疾病,危害高原地区人们的生理和心理健康,严重影响人们的生活质量。目前,国内、外对于高原地区牙周疾病的研究极少,仅见局部地区小范围、小样本的流行病学方面的调查,而高原特殊条件下牙周组织超微结构、牙周微循环、牙周微生态、细胞活性改变等深入性研究尚处于空白。 目的和意义: 牙周病是人类易患的常见病、多发病,涉及面广,是人群中导致失牙的主要原因,可波及各年龄人群,并与全身的健康密切相关,因此对牙周病发病机制、预防及治疗的研究成为口腔领域关注的重点课题。高原特殊条件下牙周炎发病率高,因此,本研究通过实验室模拟高原缺氧条件建立SD大鼠缺氧牙周炎模型,检测实验牙牙龈指数(GI)、菌斑指数(PLI)、探诊深度(PD)、牙槽骨吸收度(ABL)及组织病理学改变,作为评价建模成功与否的标准。评判建模成功后,检测并分析SD大鼠龈沟液中C-反应蛋白(C-reaction protein,CRP)、可溶性细胞间黏附分子-1 (Soluble intercellular adhesion molecule-1,sICAM-1)水平及牙龈组织中细胞间黏附分子-1 (intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)、淋巴细胞功能相关性抗原-1 (leukocyte function-associated antigen-1,LFA-1)的表达,研究高原牙周病的发生、发展机制及探索缺氧状态下免疫黏附系统的改变对牙周炎的影响,为今后制定系统的高原牙周疾病预防计划和治疗措施提供参考和依据。 材料与方法: 1.建立牙周炎组大鼠模型及模型评估 将80只(200±10) g,雌雄各半,健康的SD大鼠随机分为4组:常氧对照组(A组)(重庆平均海拔高度400 m)、常氧牙周炎组(B组)、模拟高原缺氧对照组(C组)(海拔5000 m)和模拟高原缺氧牙周炎组(D组),每组20只。通过正畸结扎丝结扎牙颈部、喂养高糖饮食、口腔涂菌及肌肉注射激素的综合方法建立常氧和模拟高原缺氧牙周炎组大鼠模型,8周后检测4组大鼠GI、PLI、PD、ABL及组织病理学改变,判断建模是否成功。 2.复制牙周炎大鼠模型,8周后取大鼠龈沟液,ELISA法检测4组大鼠龈沟液中CRP、sICAM-1浓度,进一步确定上述介质在高原环境下是否与牙周炎的发生存在相关性及其程度。 3.复制牙周炎大鼠模型,8周后取大鼠牙周组织,通过免疫组化PV法检测ICAM-1/LFA-1在4组大鼠牙龈组织中的表达,探讨ICAM-1/LFA-1介导的免疫黏附过程是否参与和调节高原牙周炎的发生。 结果: 1.X线片观察:A、C组大鼠实验牙的牙槽嵴高度正常;B、D组实验牙的牙槽嵴高度明显降低,呈混合型吸收。组织病理学改变:A组大鼠牙龈完整,结合上皮附着正常,牙周膜纤维排列整齐,无牙槽骨吸收,未见明显组织病理学改变;B组大鼠实验牙沟内上皮糜烂,向结缔组织内增生,有大量炎性细胞浸润,牙周膜纤维排列紊乱,牙周膜间隙增宽,牙槽嵴骨吸收,表面可见吸收凹陷;C组大鼠实验牙结合上皮完整,可见少量炎性细胞浸润;D组大鼠实验牙牙间乳头上皮溃疡、坏死,上皮钉突增生,可见炎症细胞浸润,并出现深的牙周袋,结合上皮向根方增殖和迁移,牙周膜间隙增宽,牙周膜纤维排列紊乱或断裂,牙槽嵴呈混合型吸收,可见破骨细胞位于骨吸收陷窝,牙槽骨吸收近根尖,牙髓血管充血明显,有骨小梁稀疏及骨沉积。 GI、PD及ABL指数在B组与A组,D组与C组,C组与A组,D组与B组比较均有统计学差异(P0.05)。 2. 8周后ELISA法检测4组大鼠龈沟液中CRP、sICAM-1浓度。A、B、C、D组GCF中CRP浓度分别为(6